口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸扩增检测试剂盒

 

 

【名称】                                                                    

中文名：口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸扩增检测试剂盒

英文名：Foot-and-mouth Disease Virus Universal Type Polymerase Chain Reaction (PCR) Diagnostic Kit

 

【目的】

本试剂盒适用于检测发病动物血清、水泡液、淋巴结等标本以及细胞培养液中所有血清型(包括A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲1型)口蹄疫病毒(FMDV-U)RNA，适用于口蹄疫病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

 

【原理】

本试剂盒用一对口蹄疫病毒特异性引物，用一步法PCR对口蹄疫病毒RNA进行扩增，产物经凝胶电泳，溴化乙锭(EB)染色，紫外灯观察，从而达到快速检测之目的。

 

【试剂组成】

名      称	数      量	规      格
RNA提取液A	1   瓶	10ml/瓶
RNA提取液B	1   瓶	10ml/瓶
逆转录酶系	1   管	40μl/管
Taq酶系	1   管	40μl/管
FMDV-U PCR MIX	1   管	800μl/管
FMDV-U阳性质控品	1   管	100μl/管
阴性质控品	1   管	250μl/管
DEPC 水	1   管	2000μl/管

【储存条件】RNA提取液A、RNA提取液B  4℃保存；其余-20℃保存，避免反复冻融。自备75%乙醇。

【试剂规格及有效期】40头份/盒，有效期6个月。

 

【标本采集】

1. 适用标本类型：溃烂或溃疡的表皮组织、发病动物水泡液、淋巴结等组织；病毒细胞培养液。

2. 标本采集：  

发病动物水泡液、病毒培养液：无菌条件下取上述液体标本0.5-1ml左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

淋巴结等固体组织：无菌条件下取上述组织1g左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检。

 

【保存和运输】上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃。但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。

 

【适用仪器】取得资格认证的定性PCR仪。

 

【使用方法】

1．RNA提取

1.1样品处理

淋巴结等固体组织：取0.5g左右组织用玻璃匀浆器匀浆或剪刀剪碎，加入1.5ml生理盐水继续研磨，待匀浆后转至1.5ml的EP管中，10000rpm离心2min。取上清100μl于1.5ml的EP管中，加入200μl RNA提取液A充分震荡，静置3min。

 

 

 

血清或病毒液：取100μl血清加入200μl RNA提取液A充分震荡，静置3min。

阴性质控品：处理：取100μl阴性质控品加入200μl RNA提取液A充分震荡，静置3min。

1.2.加入200μl RNA提取液B，用力震荡15s，4℃ 13,000rpm离心5min。

1.3.弃上清，加入1ml 75%乙醇，充分混匀，13,000rpm离心5min，小心吸去大部分残留液体。

1.4.将提取管敞口在室温空气中干燥10min，使液体挥发干净，用20μl DEPC水溶解沉淀。

FMDV-U阳性质控品：直接取3μl进行PCR扩增。

 

2．PCR扩增

从试剂盒中取出FMDV-U PCR MIX、Taq酶系，逆转录酶系室温融化并振荡混匀后，10,000rpm离心10s。

设所需要的PCR反应管管数为N（N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照），每个测试反应体系配制如下表：

计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10,000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入22μl，向每管中加入处理后样品(所获得的R