英文名称： Coelenterazine h
Coelenterazine h 腔肠素h
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Coelenterazine h 腔肠素h | 40906ES02 | 1×500μg | -20℃避光 | 1329.00 |
| Coelenterazine h 腔肠素h | 40906ES03 | 2×500μg | -20℃避光 | 2359.00 |
| Coelenterazine h 腔肠素h | 40906ES08 | 5mg | -20℃避光 | 6759.00 |
背景描述
腔肠素（Coelenterazine）是自然界中资源最丰富的天然荧光素，是绝大多数海洋发光生物（超过75%）的光能贮存分子。腔肠素可作为许多荧光素酶的底物，比如海肾荧光素酶（Rluc），Gaussia分泌型荧光素酶（Gluc），以及包括水母发光蛋白（aequorin）和薮枝螅发光蛋白（Obelia）在内的光蛋白（Photoproteins）。其发光原理是：以腔肠素为底物的荧光素酶在有分子氧的条件下，氧化腔肠素，产生高能量的中间产物，并在此过程中发射蓝色光，峰值发射波长约为450~480nm。
腔肠素作为水母发光蛋白复合物（Aequorin）的组成成分，只有与钙离子（Ca2+）结合后，才能被氧化生成高能量产物Coelenteramide，同时释放出CO2和蓝色荧光（~466nm）。其具有以下几个优点：1）能检测较大范围的Ca2+浓度（0.1-100μM）；2）样品无自体荧光，背景荧光较低，尽管信号较荧光钙离子指示剂弱，但信噪比更高，因此具有较高灵敏度；3）Aequorin能够稳定维持在细胞内，能够进行数小时至数天Ca2+的监测。
图1. 腔肠素作为水母发光蛋白辅助因子的Ca2+依赖反应流程
腔肠素具有能量转移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔肠素存在的情况下，荧光素酶（如Rluc）催化底物发生蓝光，能量转移到EYFP（增强的黄色荧光蛋白），发出绿光（~530nm）。通过Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白两者间的相互关系研究蛋白-蛋白之间的相互作用。BRET的信号可通过比较绿光和蓝光的量来进行测定，消减了因细胞数、细胞类型和其他实验变量而引起的数据变量。
主要应用
1. 活体成像。
2. 报告基因检测。
3. 检测细胞/组织内活性氧（ROS）水平：细胞和组织内的超氧阴离子和过氧化亚**阴离子能够增强腔肠素在酶非依赖性的氧化体系中自发荧光。
4. 高通量筛选。
5. 监测活细胞内钙离子水平。
产品描述
腔肠素h（Coelenterazine h），是海肾荧光素酶（Rluc）和Gaussia荧光素酶（Gluc）等多种荧光素酶的作用底物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上，适用于报告基因分析。也是水母发光蛋白的辅助因子，可用于检测活细胞中钙离子浓度。
产品性质
| 英文别名（English synonym） | 2-Deoxycoelenterazine; CLZN-h; h-CTZ |
| CAS号（CAS NO.） | 50909-86-9 |
| 分子式（Formula） | C26H21N3O2 |
| 分子量（Molecular weight） | 407.48g/mol |
| 外观（Appearance） | 浅黄色至橘色粉末 |
| 溶解性（Solubility） | 可溶于甲醇和乙醇，不可溶于DMSO |
| 纯度（Purity）（TLC） | >99% |
| 结构（Structure） |
|
运输和保存方法
冰袋运输。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性气体环境下，避免接触空气。
腔肠素h溶液的配制
腔肠素h溶解特性：腔肠素及所有衍生物均溶于乙醇和甲醇。水溶性极低，需用酸化的甲醇配制成高浓度母液后，再用水溶性缓冲液稀释，现配现用。比较稳定的溶剂是丙二醇，我司提供的即用型腔肠素h（货号：40907ES10）使用的是丙二醇和柠檬酸的混合溶剂，稳定性高，非常适用于体内动物活体成像研究。切忌溶于DMSO。
腔肠素母液的配制：称取1mg腔肠素h粉末溶解于205µl酸化的甲醇溶液（每毫升100%甲醇中含有20µl 3M或6M HCl），配制成浓度为12mM（~5mg/ml，5×）的腔肠素h储存液。分装后，-20℃（最好-80℃）避光保存，可能会有少量活性丧失，保存4周。存放在惰性气体中可长期保存。
腔肠素工作液的配制：可用去离子水、PBS或其他类型生理缓冲液稀释。现配现用。用不含Ca2+/Mg2+的PBS缓冲液将12mM储存液稀释到浓度为2.5mM（~1mg/ml）工作液，4℃避光短暂存放。进行体外实验，使用前需要室温平衡15-20min。
体内动物成像检测
1. 动物经麻醉后，视情况决定是否去皮（一般而言，黑色皮毛动物需进行此步操作）。
2. 静脉注射或腹腔注射，推荐用量25-100µl 2.5mM工作液，即注射量25-100µg/mouse。然后将动物立即放到BLI仪器内成像，以获得峰值信号。【注】：因实验体系不同，最佳使用量需要优化。
体外生物发光检测
1. 使用管光度计室温下定量检测发光情况，每个样品做三个平行。
2. 加入10µM底物10s内立即检测荧光信号，“integration time”为1s。检测浓度需根据实验条件或参考文献来优化。
注意事项
1. 粉末最好使用惰性气体（氮气或氩气），在密封良好的塑料管中避光保存于-20℃，长期保存于-70℃。管内即使存在少量空气，可能造成腔肠素h氧化失活，造成在不同试验间的量化分析结果无法比较。
2. 有文献报道，含有50mM 2-羟丙基β环糊精的pH7.0缓冲体系可溶解配制＞1mM腔肠素h溶液。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
附录1. 腔肠素及其衍生物的特性
| 货号 | 基本描述 | Em (nm) | RLC* | Relative Intensity | Half-rise time (ms)** | |
| 40904 | 天然腔肠素 Coelenterazine native | 水母发光蛋白的辅助因子，高灵敏度化学发光法检测Ca2+浓度（0.1~100µM）。常用作Rluc和Gluc等荧光素酶的报告基因检测底物。BRET分析，以及细胞/组织样本中的超氧阴离子和过氧化亚**阴离子的化学发光检测。快速再生能力比较重要的实验推荐使用本底物。 | 466 | 1.00 | 1 | 6-30 |
| 40906 | 腔肠素h Coelenterazine h | 一种水母发光蛋白复合物，其发光强度比天然腔肠素高10倍以上。适用于报告基因分析。 | 466 | 0.75 | 16 | 6-30 |
| 40910 | 腔肠素hcp Coelenterazine hcp | 腔肠素hcp-水母发光蛋白复合物的荧光强度比天然腔肠素复合物高190倍，且量子产量高和Ca2+反应速度快。 | 445 | 0.65 | 500 | 2-5 |
| 40909 | 腔肠素cp Coelenterazine cp | Coelenterazine cp 光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的15倍，且具有更快的Ca2+反应性。 | 442 | 0.63 | 28 | 2-5 |
| 40908 | 腔肠素f Coelenterazine f | 腔肠素f-光蛋白复合物的发光强度是天然腔肠素的20倍。其具有最好的细胞渗透性。当需要极高的检测Ca2+灵敏度研究水母蛋白再生实验研究中，推荐使用本底物。 | 472 | 0.80 | 20 | 6-30 |
| 40911 | 腔肠素n Coelenterazine n | 所有的腔肠素衍生物中荧光强度是最弱的，且对Ca2+反应速率也明显低于天然腔肠素。非常有用的Ca2+低灵敏检测底物。 | 468 | 0.25 | 0.15 | 6-30 |
| 40912 | 腔肠素e Coelenterazine e | 具有最高的体外水母发光蛋白反应性，且具有双发射峰，可在pCa5-7范围内通过双波长的比例测定Ca2+浓度，从而提高检测精确性。腔肠素e的荧光强度是天然腔肠素的137%。 | 405 & 465 | 0.5 | 4 | 0.15-0.3 |
| 40913 | 2-methyl Coelenterazine 二甲基腔肠素 | 可高效作用于ROS（如单态氧、超氧阴离子），是一种已报道的强抗氧化剂。 | / | / | / | / |
| 40905 | 腔肠素 400a Coelenterazine 400a | BRET研究中Rluc的首选底物。在390nm和400nm之间发蓝色光，对GFP受体蛋白的光发射干扰最小。不可作为Gluc底物。 | 400 | / | / | / |
| *RLC = relative luminescence capacity : Total time-integrated emission of aequorin in saturating Ca2+ relative to native aequorin = 1.0 **Half-Rise Time : The half-rise time is the time for the luminescence signal to reach 50% of the maximum after addition of 1mM Ca2+ to a standard of aequorin reconstituted with the coelenterazine analog of interest. All data are from O. Shimomura in Cell Calcium 14, 373 (1993). | ||||||
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| 40912ES03 | 2×500μg | 2359.00 |
HB170518