蛋白质标记染料CF 染料

CF 染料是一系列水溶性的高效荧光染料, 用于在可见光和近红外光谱区标记生物分子，尤其是蛋白质和核酸分子。基于新型化学的突破性进展，Biotium 的科学家研发了CF 染料，因为下列新颖的特性，使其性能优于其他同类产品，如 Alexa Fluor® 染料。

 

新型罗丹明化学

罗丹明染料以优异的耐光性和良好的荧光量子产量著称。因此很多Alexa Fluor® 染料具有罗丹明核心结构，但是，传统罗丹明的化学结构很难从长波长的荧光染料延伸至远红外区域甚至是更具挑战性的近红外区域，而且生物耦联后其水溶性并不理想。近来，Biotium 科学家发现一种制备从绿色到近红外多色荧光的罗丹明染料的新型化学方法。该方法被有效的应用于CF染料的产品中，尤其是远红外CF染料，而且通过这种方法制备的染料不仅水溶性极佳而且耐光性极好。

 

卓越的近红外染料

近红外染料最大的特点是比可见光范围要大很多，大滴的染料常会导致染料水溶性低、染料聚合体多、荧光量子产量差等问题。为了解决这些问题，许多商用的近红外染料比如Alexa Fluor® 、DyLight® dyes 和 IRDyes® 近红外染料，在制备时吸附了大量的带负电荷的磺化基团，其磺化作用可以在一定程度上会提高染料的溶解性和荧光性，但这样也带来了另一些更加严重的问题，经这种染

料标记的生物耦联物的非特异性结合。例如：与大量负电荷结合后可以显著的改变抗体的等电点，进而影响抗原抗体的特异性结合反应。

综合以上内容，Biotium 的科学家用革命性的方法设计出近红外染料CF，在避免引入大量负电荷的情况下，极大的保证了染料优异的理化特性。Biotium 近红外的CF 染料以花青或罗丹明染料为核心结构，该核心结构的特殊化学修饰限制了染料的分子内位移，从而获得染料的高量子产率和更好的水溶性。因此，近红外CF染料比其他近红外染料荧光强度更高，光稳定性更好。最重要的是，在免疫印迹实验上应用近红外CF染料标记蛋白质样品相对于其他商业用近红外染料制备的抗体偶联物，最大限度的提高了信噪比。

 

优异的标记效率

生物耦联反应的活性染料一般很容易水解，会在运输，操作及储存中带来诸多不便，最终导致染料结合效率低下。像Alexa Fluor®dyes, DyLight™ dyes and IRDyes®等严重的磺化作用有较强的吸湿性，恶化水解作用等问题。例如： Alexa Fluor® 488 在应用时琥珀酰亚胺脂酯 SE 活性部分远低于50%（AlexaFluor488微量标记试剂盒产品信息，Invitrogen）。相反，所有Biotium 的CF染料具有相对稳定的胺活性的SE基团型，这比大部分AlexaFluor 染料的SE更耐水解。总体来说，CF染料SE产品一贯的给出更高的标记效率，提供给用户更好的使用价值。

Mix-n-Stain™ 混合即染抗体标记试剂盒

Biotium 利用CF 染料已成功研制出一种突破性的混合即染--Mixn-Stain ™ 抗体标记试剂盒。通过这种技术，您只需混合试剂盒中选择的抗体，C F 染料及相应的反应缓冲液等，就可以在30 分钟内得到C F 染料高效标记的抗体耦联物用于免疫组化等实验。这种标记技术为多色免疫组化等提供了空前的方便，例如解决了一些当预标记的第一抗体得不到或者由于不同抗体间的相互作用，通过预标记第二抗体的间接荧光印迹无法实现等情况。Biotium 目前提供18 种CF 染料，还有更多颜色的染料在开发之中。C F 染料系列产品包括活性C F 染料，标记试剂盒，二抗标记试剂盒和联袂抗生素蛋白的CF 标记染料和更多CF 标记的生物分子。

特 点

1、亮度

CF 染料在亮度上达到或者超过 Alexa Fluor 和 Cy 等其它商业化的染料。

2、光稳定性

CF染料的光稳定性在同类染料中屈指可数

3、特异性和体内稳定性

CF标记的抗体具有高度的特异性，同时还能延长抗体在体内成像时的半衰期

4、对pH值不敏感

CF染料在很宽的pH值范围内都能维持高亮度的荧光

5、溶解性

CF染料在水以及各种有机溶剂中有高度的溶解性

6、兼容性

CF染料兼容常见的激发光源和现有的各种滤片

7、多种颜色可供选择

CF系列染料包括了从紫外到近红外的多种颜色的染料可供选择

图1. 用鼠抗golgin 97 和兔抗COX IV分别作为一抗， 用CF 488 染料标记的山羊抗鼠IgG 二抗和CF555 标记的山羊抗兔的二抗染色的HeLa 细胞。用CF647- 鬼笔环肽标记微丝， 并用Hoechest33342 标记DNA。（其中绿色=高尔基体、红色= 线粒体，蓝色= 细胞核，紫红色= 细胞骨架）

图2. 使用CF™ 543标记的山羊抗小鼠IgG结合小鼠抗α-微管蛋白抗体的HeLa细胞（微管-红色）。随后CF™488A Mix-n-Stain™ 标记的小鼠抗转铁蛋白受体抗体染色（核内体/内膜标记-绿色）。

图3. HeLa细胞经过固定，透性处理后用CF555-鬼笔环肽共轭染料染色细胞骨架（红色）和细胞核用DAPI染色（蓝色）。

图 4. 用0.5ug胞内CD3抗体或者同型对照(BD Biosciences) 孵育Jurkat 细胞并用1ug上述公司的羊抗鼠 IgG 荧光二抗染色。用BD FACS Calibur流式细胞仪的FL1通道检测荧光。纵轴代表了被荧光标记的细胞亚群的相对几何均数。柱状图的颜色分别代表CF488 (绿色), AlexaFluor488(蓝色), DyLight488 Pierce (紫色) 以及 DyLight488 KPL (红色)。