Folin -酚试剂的配制1、Folin-酚试剂甲:将1g Na2CO3 溶于50ml 0.2mol/L NaOH 中，再把0.5g(硫酸铜)CuSO4·5H2O 溶于100ml 1%的酒石酸钾钠(或酒石酸钠)溶液，然后将前者50ml 与后者1ml 混合，此试剂只能用一天，过期失效。2、Folin-酚试剂⼄:本试剂的浓度为1mol/L，此为Folin-酚试剂应用液。Folin-酚试剂平时应密封贮存于4℃冰箱中避光保存。操作方法：1）标准曲线的制作：取14 支试管分成两组，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1ml 标准蛋白质溶液(250μg/ml)，用水补足到1ml，加入5ml 试剂甲，混匀，于20-25℃放置10 分钟，再加入0.5ml 试剂乙，立即摇匀，在20-25℃保温30 分钟，然后于500nm 处比色。测定光密度值，取两组测定的平均值，以蛋白质浓度为横座标，光密度值为纵座标，绘制标准曲线值为定量的依据。2）样品测定：取1ml 样品溶液（约合20-250μg/多肽或蛋白质）加入5ml 试剂甲混匀，于20-25℃放置10 分钟，再加0.5ml 试剂乙（Folin-酚），立即摇匀，在20-25℃保温30 分钟，然后于500nm 处比色，以1ml 水代替样品作空白对照。测定后，可以在标准曲线中查出未知样品的浓度。若用0.5cm 光程的比色杯进行比色，可按下面方法进行操作：取0.2ml样品溶液（约含5-100μg 多肽或蛋白质）加入1ml 试剂甲（可选用0.3-0.5cm 直径的小试管）混匀，10 分钟以后，再加入0.1ml 试剂乙 ，立即混匀，30 分钟后比色。一般来说，若多肽或蛋白质的浓度在2-25μg，测波长755nm,，而25μg 以上则采用500nm 比色为宜。SolarbioBeijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 010-56371210Fax: 010-56371281/82Http://www.solarbio.cn