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BCA蛋白定量试剂盒

 

产品简介：

碱性条件下，蛋白将Cu²⁺还原为Cu⁺， Cu⁺与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

BCA 法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，***）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可用BestBio贝博Bradford蛋白浓度测定试剂盒。

 

产品组成：

产品组成	301001（250 assays）	301002(1000 assays)
蛋白标准(1mg/ml)	0.5ml	2ml
BCA试剂A	50ml	200ml
BCA试剂B	1ml	4ml

 

使用方法：

A． 96孔酶标板测定：

1.       BCA工作液配制。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml
   BCA试剂A加100μlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml
   BCA试剂A加100μlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml
   BCA试剂A加100μlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。

2.       标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：

孔号	0	1	2	3	4	5	6	7
蛋白标准（ml）	0	1	2	4	8	12	16	20
去离子水（ml）	20	19	18	16	12	8	4	0
BCA工作液（ml）	200	200	200	200	200	200	200	200
对应的蛋白含量（mg）	0	1	2	4	8	12	16	20

 

3.       振荡混匀后，37℃放置30分钟。

4.       用酶标仪测定A562，以不含BSA的光吸收值为空白对照。

5.     以蛋白含量（mg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

6.       样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取20ml样品，加入200ml BCA工作液，混匀后37℃放置30分钟，然后以0号孔为对照，测定样品吸收值A562。

7.       根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。

8.       计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积20ml，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

 

B． 比色皿测定

        按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。

 

储存条件：

BCA试剂室温保存。蛋白标准-20°C保存。        有效期：一年。

注意事项：

1.     在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解, 如发现细菌污染则应丢弃。

2.     因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定，每次测定都需重做标准曲线。若需得到更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯 度和样品均需做复孔。

3.     若测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化，原因可能是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质。BCA蛋白浓度测定试剂盒对样品中各种物质详细的兼容性，参见附件BCA蛋白浓度测定兼容性表。

4.     试剂A 与试剂B 用应密闭保存。

5.      当试剂A 和B 混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失。

6.     使用温箱孵育时，应注意防止因水份蒸发影响检测结果。

 

附表：

以下是不干扰BCA方法测定的物质浓度：
成分	相容浓度	成分	相容浓度
NP-40	5.0%	葡萄糖	10mM
Emulgen	1.0%	EDTA	10mM
Hepes	100mM	Sodium Chloride	1.0M
DTT	1mM	NaOH	0.1M
Guanidine•HCl	4.0M	Ammonium Sulfate	1.5M
Triton X-100	5.0%	乙酸钠 pH 5.5	200mM
辛基糖苷	5.0%	SDS	5.0%
Urea	3.0M	Brij-35	5.0%
蔗糖	40%	Lubrol	1.0%
Glycine, pH 2.8	100mM	CHAPS	5.0%

 

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