SDS－PAGE电泳
1.清洗玻璃板：
一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后立在筐里晾干。

2. 灌胶与上样
1）玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。）
2） 按前面方法配10%分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶时，可用10ml枪吸取5ml胶沿玻璃放出，待胶面升到绿带中间线高度时即可。然后胶上加一层水，液封后的胶凝的更快。（灌胶时开始可快一些，胶面快到所需高度时要放慢速度。操作时胶一定要沿玻璃板流下，这样胶中才不会有气泡。加水液封时要很慢，否则胶会被冲变型。
3）当水和胶之间有一条折射线时，说明胶已凝了。再等3min使胶充分凝固就可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
4）按前面方法配4%的浓缩胶,加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，从而使加样孔的上样体积减小，所以在浓缩胶凝固的过程中要经常在两边补胶。待到浓缩胶凝固后，两手分别捏住梳子的两边竖直向上轻轻将其拔出。
5）用水冲洗一下浓缩胶，将其放入电泳槽中。（小玻璃板面向内，大玻璃板面向外。若只跑一块胶，那槽另一边要垫一块塑料板且有字的一面面向外。）
6） 测完蛋白含量后，计算含50 ng蛋白的溶液体积即为上样量。取出上样样品至0.5ml离心管中，加入5×SDS 上样缓冲液至终浓度为1×。（上样总体积一般不超过15 μl，加样孔的最大限度可加20 μl样品。）上样前要将样品于沸水中煮5min使蛋白变性。
7）加足够的电泳液后开始准备上样。（电泳液至少要漫过内测的小玻璃板。）用微量进样器贴壁吸取样品，将样品吸出不要吸进气泡。将加样器针头插至加样孔中缓慢加入样品。（加样太快可使样品冲出加样孔，若有气泡也可能使样品溢出。加入下一个样品时，进样器需在外槽电泳缓冲液中洗涤3次，以免交叉污染。
3.电泳
电泳时间一般4～5 h，电压为40V较好，也可用60V。电泳至溴酚兰刚跑出即可终止电泳，进行转膜。
4.配胶说明：
1、先在过硫酸铵干粉中加入蒸馏水或去离子水(每克过硫酸铵需加水10ml)配置成10%溶液，将溶液分装成
小体积后冻存于-20℃，制备凝胶时融化后使用，10%过硫酸铵溶液现用现配，4℃有效期7-30 天。
2、检测SDS 溶液是否澄清，若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解，不影响效果。3、根据目标蛋白分子量大小，选取凝胶浓度，按下表配制。先配分离胶，再配浓缩胶。
 SDS-PAGE凝胶制备试剂盒

货号：P1200-1/P1200-2

规格：25块/50块SDS-PAGE凝胶

产品内容：

产品简介：

北京索莱宝公司生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒是按照经典方法配制而成。本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶。本试剂盒可配制不同规格、不同聚合度的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶) 约25/50块。

注意事项：

1. TEMED和10%过硫酸铵最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。10%过硫酸铵溶液在4℃有效期为一周； TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温箱凝固。灌完分离胶后，轻轻的加1mL ddH2O封上层，胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶前，先倾去水层，再用吸水纸吸干。浓缩胶灌好后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后，放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，可防加样孔变形。

2. 配制量可按上表等比加减。如果所用胶浓度与上面不同，可自行调整，主要是调整30%丙烯酰胺的量（需要浓度×总体积/30%），最后用水补足总体积。

配胶说明：

1. 先在过硫酸铵干粉中加入蒸馏水或去离子水(每克过硫酸铵需加水10mL)配置成10%溶液，将溶液分装成小体积后冻存于-20℃，制备凝胶时融化后使用。4℃保存有效期7-30天。

2. 检测SDS溶液是否澄清，若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解，不影响效果。

3. 根据目标蛋白分子量大小，选取凝胶浓度，按下表配制。先配分离胶，再配浓缩胶。

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