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Tris-Tricine-SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒

货号：P1320

规格：25块/50 块/100 块PAGE凝胶

产品内容：

本产品所提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS 溶液（0.5g APS

加5ml 双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。

产品简介：

常规的Tris-SDS-PAGE 电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10 kD 以下的蛋白分辨率

极低。而Tricine-SDS-PAGE 可以很好的分离分子量在1-10 kD 的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主

要方法。本产品包括Tricine-SDS- PAGE 凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的

凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。。

注意事项：

1、10%APS 配制后分装-20 度保存。APS 溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，

以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20 度保存的10%APS。

2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

4、丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

配胶说明：

根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE 分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

25T 50T 100T 保存条件

49.5%T 3%C 15ml 30ml 60ml 2-8℃，避光

49.5%T 6%C 50ml 100ml 200ml 2-8℃，避光

凝胶缓冲液 70ml 140ml 280ml 2-8℃

50%甘油 30ml 60ml 120ml 室温

APS 0.25g 0.5g 1.0g 室温

TEMED 400ul 750ul 1.5ml 室温，避光

说明书一份一份一份

分离胶夹层胶浓缩胶

20%/4.5ml 16.5%/4.5ml 15.5%/4.5ml 10%/2ml 4%/2ml

49.5%T 3%C / / / 0.407ml 0.160ml

49.5%T 6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml / /

凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml 0.667ml 0.496ml

I 配制分离胶

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。

2、加入10%APS 和TEMED，立即涡旋混匀5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液（1 mm mini-gel，分离胶溶液加约4 ml ），然后在分离胶溶液上

轻轻覆盖一层1-3 cm 的水层，使凝胶表面保持平整。

4、静置，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制夹层胶

去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水尽量吸去。

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2、加入10%过硫酸铵和TEMED，立即涡旋混匀5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面（对于1 mm 的mini-gel，夹层胶溶液加约1 ml ），然后在

夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层，使凝胶表面保持平整。

4、静置，待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

III 配制浓缩胶

去除覆盖在夹层胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。

1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。

2、加入10%过硫酸铵和TEMED，立即涡旋混匀5-10 秒，以使溶液充分混匀。

3、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

4、待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。

5、进行电泳操作。

IV 电泳

将电泳槽放入4℃或冰水浴中，外槽加入阳极缓冲液（T1225），内槽加入阴极缓冲液（T1215），30V 预电泳

10min，将样品（已经过Tricine 专用上样缓冲液P1325 处理）加入点样孔后30V 电泳1 小时，100V 电泳至溴酚

蓝到达胶底部后停止电泳，进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。