Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒 | ||||||||||||||||||||
型号:null | ||||||||||||||||||||
价格:请致电:010-57128832,18610462672 | ||||||||||||||||||||
品牌: 美国 | ||||||||||||||||||||
传统分离膜蛋白的方法繁琐而耗时,并且都需要梯度分离和昂贵的超高速离心仪器。而Thermo Scientific Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒是一种快速、简单、便宜的膜蛋白分离方法。使用该试剂盒的三种试剂可以从培养的哺乳动物、酵母细胞以及软或硬的哺乳动物组织中抽提并选择性地富集膜蛋白。 产品特点:
使用Thermo Scientific Mem-PER 真核细胞膜蛋白抽提试剂盒来溶解和分离酵母膜内蛋白(酿酒酵母菌株EGY-194)。向湿重大10-15mg的细胞沉淀中加入80μlMem-PER 试剂 A和100-150mg、尺寸为405-600μm的酸洗玻璃珠并在室温涡旋10分钟来破裂酵母细胞的细胞壁。短暂离心收集玻璃珠,然后将细胞裂解物转移到新的离心管中并将离心管置于冰上。用720 μl Mem-PER试剂B和C洗涤收集的玻璃珠然后将洗涤液加入到细胞裂解液中并在冰上孵育30分钟。样本进行4-12%Bis-Tris凝胶电泳。 分别对从大鼠肝(图A)和大鼠心(图B)制备的膜蛋白进行蛋白免疫印迹。利用蛋白免疫印迹对通过Mem-PER 试剂制备的疏水(膜蛋白)成分和相应的亲水成分进行分析,分别对VDAC (31 kDa, Affinity BioRegeants),cellugyrin (29 kDa, BDTransduction Laboratories)及flotillin-1 (48 kDa, BD Transduction Laboratories)进行免疫印迹分析。M = 膜蛋白组份,H =亲水组份。 对Thermo Scientific Mem-PER 试剂溶解的蛋白进行分级。使用Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒对三种细胞系的蛋白进行溶解和抽提。每组疏水(膜蛋白)和亲水组分均通过标准操作获得,利用蛋白质免疫印迹分析四种细胞定位已知的蛋白。利用SDS-PAGE/蛋白质免疫印记分析对COX4进行分析之前,使用SDS-PAGE样品制备试剂盒去除膜组分中的去垢剂。所有碎片组分中检测到的蛋白污染量极低。缩写: AchE = 乙酰胆碱酯酶, COX4 =细胞色素氧化酶4亚基,hsp90 =热休克蛋白90, M = 可溶性膜蛋白组分,H = 亲水性蛋白组分。 参考文献 Chattopadhyay, K., et al. (2006).J. Immunol. 177, 3920-3929 Fujii, N., et al. (2007).Cancer Res. 67, 573-579. Nurnberger, J., et al. (2002). Mol. Biol. Cell.13, 3096-3106. Stephano, G.B., et al. (2003). Endocrinology144(4), 1234-1240. Tu, C-L., et al. (2008).J. Biol. Chem.283,3519-3528.Wojnar, P., et al. (2003). J. Biol. Chem.278(18), 16209-16215. 订购信息:
相关产品:
|