除了直接标记外，二抗可采用生物素标记。生物素自身并不善生检测信号，但可以和亲核素结合，它可以表及各种分子，包括酶、同位素、荧光染料和胶体金。生物素抗体不会改变抗体的结合性质。以生物素亲和素结合为基础的检测法具有高灵敏度，因为这种复杂的结合模式是信号放大。