诺如病毒GⅠ/GⅡ/GⅣ核酸检测试剂盒(荧光RT-PCR法)
英文名称： Detection Kit for NorovirusGI/GII/GIV (Real-time RT-PCR Assay)
型号:null    产品货号： FS008
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 国产

诺如病毒分为5个基因组，感染人的诺如病毒型别分属GI、GII、GIV三个基因组，GI、GII国内常见，GIV相对少见但不排除通过输入随时出现的可能。本试剂盒是目前国内唯一以单管一步法同时检测这三组诺如病毒的荧光PCR试剂盒，具有快速(支持高速扩增，1小时内可完成)、灵敏、可靠、简便的特点，在人诺如病毒监测和暴发疫情应急检测方面具有重要的应用价值。

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4.操作简单
不需使用***酸化引物、不需Dpn I内切酶对甲基化的质粒DNA模板降解。



 


操作过程：

 

 


(一）载体线性化
采用酶切或PCR扩增方法可以将载体线性化。建议利用双酶切,因为质粒的线性化不彻底将会导致大量阴性克隆的产生。如使用PCR扩增获得线性化质粒，所用的酶应选用高保真酶（如Pfu聚合酶）。

（二）引物的设计
首先，设计引物时应该在遵循常规引物设计原则的基础上，把突变设计入引物。其次，引物的纯度对突变成功率有很大影响，因此使用HPLC或PAGE纯化的引物。

 

 

 

1.载体两端的引物设计

引物末端应与载体末端至少具有10-15个同源碱基，由此得到的PCR产物两端便分别带上了10-15个与载体序列同源性的碱基。

 

 



2.突变引物的设计

 

 



 



3.PCR扩增

（1）使用设计好的引物分别进行多个突变DN**断的PCR扩增：


 



（2）按以下2步法扩增条件进行PCR：



（3）如果按上述条件操作结果不理想，可尝试按以下3步法扩增条件进行PCR：

 

 


4.突变片断的组装

（1）将多个突变PCR片段和线性化载体以摩尔比1:1加到试管中进行组装反应，较长的PCR片段要增加其添加量，以维持其适当摩尔数目：

 

 

 

 

（2）混匀后在42℃孵育30分种，然后转移到冰上。
（3）使用5 μl反应液转化到感应态细菌中。