非冻型组织DNA保存液
英文名称： Tissue DNA locker
型号:null    产品货号： 3660-100
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 北京

>

 

 

产品特色：

1.灵活的克隆位点：任何载体的任意位置。
2.快速简便：30分钟完成载体构建。
3.精确：不会增加任何额外的程序。
4.效率高：高达90%阳性克隆率。


适用范围：

 

 


操作流程：

1.采用酶切或PCR扩增方法将载体线性化。
2.使用设计好的引物进行目的DN**段的PCR扩增。
3.将目的DN**段和线性化载体以摩尔比2:1加到试管中进行重组反应：

 

 

4.混匀后在42℃孵育30分种，然后转移到冰上。
5.使用5 μl反应液转化到感应态细菌中。


PCR引物设计：

 

 

 

1.引物的质量对重组反应的成功率有很大影响，因此强烈建议使用HPLC或PAGE纯化的引物。

 

2.引物设计时应该在遵循常规引物设计原则的基础上，把15-20个同源碱基序列导入引物。 根据线性化载体末端的不同类型进行如下引物设计：

 

 

 




 


 

 

 

产品简介：

 

无缝克隆试剂盒提供了一种新颖、高效、快速的基因克隆方法，只需DNA插入片段末端与载体末端具有15 - 20个同源碱基序列，就可以在载体的任意位点完成一个或多个目标DN**段的克隆重组，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。

 

 

 

ffffff>
7.3µl × 3
0.4µl × 3
7.1µl × 3
0.8µl × 3
6.7µl × 3
4.0µl
(×4)
26.0µl
(×4)
0.4µl
(×4)
29.6µl
(×4)
0.8µl
(×4)
29.2µl
(×4)
1.6µl
(×4)
28.4µl
(×4)
3.2µl
(×4)
26.8µl
(×4)

注：表中所提到的比率均为重量比（w/w）
这四种比率， 总的 siEGFP 用量为 4.0ml x 4 = 16ml; 总的Opti-MEM 用量为 26.0ml x 4 = 104 ml.

五：每25ul的 siRNA 和转染试剂混合到一起，在RT中孵化15分钟，每种混合物中各取15ul 加到指定的板中。

六： SunBio 转染试剂辅助siEGFP所得的 knockdown 效率，在转染后 48小时通过荧光显微镜即可观察。（siRNA anti-luciferase 实验在 luciferase稳定的细胞系中和在 EGFP 稳定的细胞系中是相似的.）

SunBioTrans-EZ siRNA转染试剂在Hela细胞中对内源性基因的转染流程 (Example #2)
SunBio转染试剂在Hela细胞中，辅助siRNA对内源性基因laminA/C的knockdown作用.

一：细胞准备
    Hela细胞使用含有10%小牛血清的DMEM培养基，以3×105/2毫升/孔的密度种在6孔板里，过夜培养, 在转染实验时细胞的融合度达到 80～90%。

二：试剂准备
    SunBio转染试剂(5mg/ml备用液)与 siRNA (0.25mg/ml, 相当于 20mM)在Opti-MEM中分别以 2/1, 4/1 (w/w)的比率准备好，用于转染效率实验。

三：板的规格：6孔板, siEGFP的用量按5.625微克/孔计算配制混合物用于转染实验.

Blank/空白
SunBio 转染试剂/siEGFP (2/1): 5.625mg
SunBio转染试剂/siLamin A/C (2/1): 5.625mg
SunBio 转染试剂/siLamin A/C (4/1): 5.625mg

siLamin A/C即针对Lamin A/C的siRNA; siEGFP即针对EGFP的siRNA, 在本实验中作为非相关siRNA对照.

四：使用SunBio转染试剂准备siRNA-Lamin A/C混合溶液 siRNA-Lamin A/C的用量为5.625mg/孔，与SunBio试剂按不同比例配制混合物用于转染实验.

siEGFP (0.25 µg/µl)
(5.625mg/孔)

Opti-MEM

SunBio 转染试剂 (5 µg/µl) / siEGFP (5.625 µg/孔) 比率 (2/1)

SunBio 转染试剂

Opti-MEM

22.5ml

97.5ml

2.25ml

117.75ml



siLamin A/C (0.25 µg/µl)
(5.625mg/孔)

Opti-MEM

SunBio 转染试剂 (5 µg/µl) / silamin A/C (5.625 µg/孔) 比率 (2/1)

SunBio 转染试剂

Opti-MEM

22.5ml

97.5ml

2.25ml

117.75ml



siLamin A/C (0.25 µg/µl)
(5.625mg/孔)

Opti-MEM

SunBio 转染试剂 (5 µg/µl) / silamin A/C (5.625 µg/孔) 比率 (4/1)

SunBio 转染试剂

Opti-MEM

22.5ml

97.5ml

4.5ml

115.5ml

 

五：每110ml silaminA/C和转染试剂混合后，在RT中反应15min, 每种混合物中各取200ul加入到指定的孔板中。

六：SunBio 转染试剂辅助siLamin A/C 所得的 knockdown 效率， 转染后48小时后通过RT-PCR即可观察。


SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂

产品规格： 5 mg/ml

产品包装： 1 ml/支

试剂保存： 4℃保存，请勿冷冻

图片资料

在Hela-EGFP 细胞中，SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂 siegfp 的转染效果 




 

 

在 PC-3M-Luc-C6 细胞中 SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂对 siLuciferase 的转染效果



 

 

Hela-EGFP 细胞在使用SunBio Trans-EZ siRNA 转染试剂转染 siegfp之后的细胞活力测试 ¾ MTT 分析