无内毒素质粒小量制备试剂盒（离心柱型）
英文名称： 无内毒素质粒小量制备试剂盒
型号:null    产品货号： DP2601
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: 国产

无内毒素质粒小量制备试剂盒（离心柱型）
产品编号
包装(1)
价格(1)
包装(2)
价格(2)
DP2601
20次
220元
50次
420元
产品说明：细菌内毒素（Endotoxin）是革兰氏阴性菌细胞壁上特有的，它主要成分是脂多糖中的类脂A。DNA溶液中污染的内毒素是造成原代培养细胞转染效率低下的一个重要原因。本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，粗提物通过独特的内毒素清除剂选择性结合离心除去内毒素，然后离心吸附柱内的硅基质膜在高盐，低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除， 最后低盐，高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。纯化的质粒内毒素<0.1 EU/ug。 
试剂盒特点: 
◆    离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 
◆    独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除。有效防止了质粒被残留的核酸酶降解。 
◆    独特内毒素清除配方，清除内毒素效果一般小于<0.1 EU/ug。 
◆    快速，方便，不需要使用有毒的***酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高，纯度好，直接可以用于转染，酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。 操作流程: 收集菌体-碱裂解-中和-离心去沉淀-去内毒素试剂抽提-离心吸附柱吸附质粒-漂洗-洗脱. 超纯无内毒素

d> 质粒小量制备试剂盒 50次
AxyPrep 质粒DNA小量试剂盒
    本试剂盒采用改进的SDS 碱裂解法，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到快速纯化质粒DNA 的目的。适合于从1-4 ml 细菌培养物中提取多至20 μg 高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。
 
一、试剂盒组成、贮存、稳定性
 
说明书，耗材：DNA 制备管，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。
 
RNase A：50 mg/ml，室温保存。
 
Buffer S1：细菌悬浮液。加入RNase A 后，4°C 贮存。
 
Buffer S2： 细菌裂解液，室温密闭贮存。(若出现沉淀，应于37°C 温浴溶解并冷却至室温后再使用。）
 
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。
 
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。
 
Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100乙醇或95乙醇。
 
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。
 
二、注意事项
 
Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。
 
三、实验准备
 
1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1 中，4°C贮存。
 
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。
 
3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。
 
四、操作步骤
 
第一次使用时，将试剂盒携带的RNase A全部加入到Buffer S1 中，混合均匀，4°C保存。
 
1. 取1-4 ml 在LB 培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g 离心1 min，弃尽上清。
 
2. 用250 μl 已加入RNase A 的Buffer S1 悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。
 
3. 加入250 μl Buffer S2，温和并充分地上下翻转混合4-6 次均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步骤不宜超过5 min。
 
4. 加入350 μl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6-8 次，12,000×g 离心10 min。
 
步骤5～7 可以选择负压法或离心法纯化质粒DNA。
 
A. 负压法
 
5A. 将质粒DNA 制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4 中的离心上清并转移到制备管中，开启并调节负压至-20-30 英寸*柱，缓慢吸走管中溶液。
 
6A. 加500 μl Buffer W1，吸尽管中溶液。
 
7A. 加700 μl Buffer W2，吸尽管中溶液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。
 
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
 
B. 离心法
 
5B. 吸取步骤4 中的离心上清并转移到DNA 制备管（置于2 ml 离心管中），12,000×g 离心1 min。
 
6B. 将制备管置回离心管，加500 μl Buffer W1，12,000×g 离心1 min，弃滤液。
 
7B. 将制备管置回离心管，加700 μl Buffer W2，12,000×g 离心1 min， 弃滤液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。弃滤液。
 
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。
 
8. 将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。
 
9. 将制备管移入新的1.5 ml 离心管中，在DNA 制备膜正中央加60-80 μl 水或Eluent，室温静置1 min。12,000×g 离心1 min。