在许多生物学研究中钙离子的测定非常重要。在与钙离子结合的条件下，荧光探针显现出光谱响应，这使研究者可以通过利用荧光显微镜、流式细胞仪、荧光分光镜和荧光分光仪等来研究细胞内部游离的Ca2+浓度的变化。 Rhod-FF 与 Ca2+ 结合能力较低，适合于测量 Ca2+浓度从 10 到 200 uM.像它的前体Rhod-2指示器, Rhod-FF在不结合Ca2+时是没有荧光的，在结合Ca2+  in 其产生强烈的绿色荧光。