操作步骤： 

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

    1、称取土壤样本 0.1-0.5g，在液氮中充分研磨成细粉末，加入 450ul 溶液 A  震荡混匀.也可直接称取样本 0.1-0.5g  于离心管(建议使用 2ml  圆底管)，加入 450ul  溶液 A  剧烈震荡混匀 1-2min  至没有固体块。 使用液氮研磨效果最佳。  

2、加入 50ul  溶液 B  充分颠倒混匀(  不要剧烈震荡)，65℃水浴 6min，每 2min 充分颠倒混匀一次。  

3、加入 100ul  溶液 C  充分颠倒混匀(  不要剧烈震荡)，12000rpm离心 10min   。  

4、将上清转移到新的离心管，12000rpm离心 2min   。  

5、在吸附柱中加入 200ul  溶液 D  ，将离心后的上清加入到带有溶液 D  的吸附柱中，用移液器吹吸几次混匀，12000rpm离心 1min。 

6、将收集管中的滤出液混匀后重新吸入吸附柱(  必须)，12000rpm离心 1min。

7、倒掉收集管中的废液，在吸附柱中加入漂洗液 500ul，12000rpm离心 1min。  

8、倒掉收集管中的废液，重复步骤 7  两次(共漂洗三次)。  

9、倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管，12000rpm离心 2min  。  

10、拿出吸附柱在室温干燥数分钟(  因季节及气候等因素不等)，或 50℃干燥 1min。  

11、将吸附柱放入一个新的离心管中，加入 50-100ul  洗脱液(65 ℃预热)，12000rpm离心 1min。  

12、将离心管中的液体重新加入到吸附柱中，12000rpm离心 1min。离心管中即为土壤微生物 DNA  溶液。  

13、若产物 PCR 效果差，可以适当稀释 DNA产物，或添加 1/10 体积的 PCR 增强剂。

注意事项: 

1、新鲜的土壤样本会得到更高的产率，不同样本在采样前应先查阅相应的最佳保存条件。  

2、若溶液中出现浑浊可在 37℃水浴中溶解片刻至清澈，不会影响结果。  

3、在需要吸取上清液的步骤中应避免吸到沉淀，否则会堵塞吸附柱，并影响产物纯度。 

4、洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul  ，体积过小会影响回收效率；建议使用试剂盒附带的洗脱缓冲液，用水洗脱也会损失部分产物；DNA 应保存在-20 ℃避免反复冻融，以防降解。  

5、若产物含有腐殖质残余则会严重影响 DNA的光吸收值，应采取电泳检测和分光光度计检测相结合的方

式鉴定。  

6、液体试剂避免接触皮肤，若意外接触应立即使用大量清水冲洗。 

本实验相关试剂：

E1020	EB染色液
D1010	6×DNA LoadingBuffer
T1060	50×TAE缓冲液
T1050	5×TBE缓冲液
M1060	D2000DNALadder
M1400	1kbDNALadder
G8142	GoldViewII型核酸染色剂(5000×)

以下为索莱宝实验室自产相关试剂盒。

D1500	植物基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1600	细菌基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1700	动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1800	全血基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D1850	全血基因组DNA提取试剂系统	50T/200T	360/960
D1900	酵母基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D2100	通用基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
D2300	真菌基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	500/850
D2400	DNA病毒基因组提取试剂盒	50T/100T	400/700
D2600	土壤基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	680/1200
D2700	粪便基因组DNA提取试剂盒	50T/100T	400/700
R2000	RNA病毒基因组提取试剂盒	50T/100T	700/1180

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