真菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称: 真菌基因组DNA提取试剂盒
型号:null    产品货号: D2300
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: solarbio

真菌基因组DNA提取试剂盒

 

        真菌是具有真核和细胞壁的异养生物。种属很多,已报道的属达 1 万以上,种超过 10 万个。真菌通常分为三类,即酵母菌、霉菌和蕈菌(大型真菌)。对于酵母菌和霉菌,可以用玻璃珠处理,而对于大型真菌,可直接用液氮研磨。经过前期处理的菌液,用硅质膜吸附,即可得到高纯度的基因组。提取纯化后的 DNA,可以直接用于 PCR/Real time-PCR,sequencing,Southern blot,mutant analysis,SNP  等下游应用实验。

产品包装:

 

操作步骤: 

     使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机

在室温下离心。 

1、样品的处理: 

 1)对于酵母菌,取 1-2ml 培养好的菌液,离心收集,弃上清。加入 200ul  溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5-10min。 

 2)霉菌(孢子也可相同处理):取 50-100mg 菌丝,加 200ul 溶液 A,用玻璃研磨器适当研磨分散菌丝,加入 20ul RNase A,再加入 100mg 玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 30min。 

 3)大型真菌(如蘑菇等):称取 50-100mg 样品,倒入适量的液氮,立即研磨重复 3 次,使样品研成粉末(如无液氮,可加 200ul 溶液 A后用玻璃研磨器适当研磨),加200ul 溶液 A,加入 20ul RNase A,再加入 100mg玻璃珠,在高速振荡器上振荡,约 5min。 

2、加入20ul 10mg/ml 的蛋白酶 K,充分混匀, 55℃水浴消化, 30min。消化期间可颠倒离心管混匀数次, 12000rpm离心 2min。将上清转移到一个新的离心管中。如有沉淀,可再次离心。 

3、在上清中加入 200ul 溶液 B,充分混匀。如出现白色沉淀,可放 55℃水浴 5min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的 DNA 量少及不纯,还有可能导致上柱后堵柱子,请增加消化时间。 

4、再加入 200ul 无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提取,将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,放置 2分钟。 

5、12000rpm离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 

6、向吸附柱中加入 700ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 

7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液,12000rpm离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。 

8、12000rpm离心 2min,将吸附柱置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。 

9、将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心 1min。 

10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中,室温放置 2min,12000rpm离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。  

注意事项: 

1.  由于真菌种类万千,对于一些特别难处理的真菌,可用液氮研磨,再用玻璃珠振荡,蛋白酶K处理,一般都可以得到一定量的基因组DNA,如电泳检测很弱,一般PCR都会有较好结果。 

2.  若溶液A或溶液B中有沉淀,可在 55℃水浴中重新溶解。 

3.  如果DNA提取量很少,可加长玻璃珠处理时间,如果提取DNA成弥散短条带,可减少玻璃珠处理时间。 

4.  洗脱缓冲液的体积最好不少于 50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在 8.0 左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH值低于 7.0 会降低洗脱效率;DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。 

5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DN**段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DN**段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为 1相当于大约 50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。OD260/OD280比值应为 1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。 

6.  在确保样品无误的情况下,如经过多次试验,都无法提出DNA,请将部分样品寄至我公司,我们代为摸索优化条件,以使您的实验能够正常进行下去。

本实验相关试剂:

 

E1020

EB染色液

D1010

6×DNA LoadingBuffer

T1060

50×TAE缓冲液

T1050

5×TBE缓冲液

M1060

D2000DNALadder

M1400

1kbDNALadder

G8142

GoldViewII型核酸染色剂(5000×)

以下为索莱宝实验室自产相关试剂盒:

D1500 植物基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
D1600 细菌基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
D1700 动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
D1800 全血基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
D1850 全血基因组DNA提取试剂系统 50T/200T 360/960
D1900 酵母基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
D2100 通用基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
D2300 真菌基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 500/850
D2400 DNA病毒基因组提取试剂盒 50T/100T 400/700
D2600 土壤基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 680/1200
D2700 粪便基因组DNA提取试剂盒 50T/100T 400/700
R2000 RNA病毒基因组提取试剂盒 50T/100T 700/1180
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