高通量检测miRNA表达的方法有许多,如芯片检测或微珠检测的方法,这些方法在分析时需要把miRNA反转录成cDNA。为了简化实验流程,Signosis开发出一种微孔板杂交技术用于高通量检测miRNA的表达,总RNA无需预处理,可直接进行杂交和检测,重要的是可同时分析47种miRNA的表达。
A. 产品优势
灵敏度高——较miRNA Northern Blot分析敏感100倍;
分辨力强——在分辨同源miRNA 时,较Northern Blot有更高的分辨力;
差别定量——两个或更多样本miRNA表达的差异可定量比较;
操作简便——整个实验操作步骤只是加样、孵化、洗涤,如ELISA实验一样简单。
B. 技术原理
通过捕获oligo和连接oligo将待测miRNA分子的一端与微孔板连接,另一端连接生物素标记的检测oligo,再由辣根过氧化物酶标记链霉亲和素和发光底物检测。这种杂合体结构对miRNA分子序列非常敏感,一个核苷酸的差异即会阻止杂合体的形成,因此可分辨同源miRNA。
C. 原理及操作步骤示意图

D. 结果展示

用miRNA微孔板芯片检测试剂Ⅰ分析人骨骼肌和肾脏中的47种miRNA的表达,结果显示miR-1和miR-133在骨骼肌中特异性表达。
细胞凋亡相关miRNA微孔板芯片检测试剂(47 miRNAs) MA-1002
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
A | Let-7a-5p | miR-16-5p | miR-142 | miR-155-5p | miR-202-5p | miR-337 | Let-7a-5p | miR-16-5p | miR-142 | miR-155-5p | miR-202-5p | miR-337 |
B | Let-7b-5p | miR-21-5p | miR-144 | miR-182-5p | miR-204-5p | miR-338 | Let-7b-5p | miR-21-5p | miR-144 | miR-182-5p | miR-204-5p | miR-338 |
C | Let-7c-5p | miR-24-3p | miR-145-5p | miR-184 | miR-210-3p | miR-345 | Let-7c-5p | miR-24-3p | miR-145-5p | miR-184 | miR-210-3p | miR-345 |
D | miR-1 | miR-25-3p | miR-148 | miR-188-5p | miR-214-3p | mir-376c-3p | miR-1 | miR-25-3p | miR-148 | miR-188-5p | miR-214-3p | mir-376c-3p |
E | miR-7-5p | miR-26 | miR-150-5p | miR-193a | miR-216-5p | miR-369-5p | miR-7-5p | miR-26 | miR-150-5p | miR-193a | miR-216-5p | miR-369-5p |
F | miR-10a-5p | miR-96 | miR-151-3p | miR-193b | miR-218-5p | miR-369-3p | miR-10a-5p | miR-96 | miR-151-3p | miR-193b | miR-218-5p | miR-369-3p |
G | miR-15a-5p | miR-101 | miR-152 | miR-196a-5p | miR-224-5p | miR-371 | miR-15a-5p | miR-101 | miR-152 | miR-196a-5p | miR-224-5p | miR-371 |
H | miR-15b-5p | miR-133b | miR-153-3p | miR-197-3p | miR-296-5p | U6 | miR-15b-5p | miR-133b | miR-153-3p | miR-197-3p | miR-296-5p | U6 |