具有超强耐热性和延伸效率的新一代逆转录酶

HiScript® II Reverse Transcriptase

 

• 50℃半衰期超过240分钟，55℃半衰期可达60分钟

• 可合成创纪录的20 kb全长cDNA

• 5分钟即可合成长达10 kb的cDNA，适合快速逆转录反应

• 更高的杂质耐受度

• 更高的检测灵敏度，分子诊断首选逆转录酶

 

 

 

 

 

 

 

图1. 四种不同的逆转录酶分别在50℃和55℃与RT reaction mixture孵育不同时间。剩余的酶活用标准方法测定。

SS III: Superscript® III。

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

图2. 以1 μg HeLa细胞总RNA或小鼠骨骼肌细胞总RNA (for Nebulin)为模板，用HiScript®II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (R211-01)进行逆转录。取1 μl  cDNA为模板，用Vazyme LAmp® DNA Polymerase扩增。

M. DL15000 Marker.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

图3. 以1 μg HeLa细胞总RNA为模板，Oligo dT23 VN为引物，分别用HiScript® II Reverse Transcriptase或Superscript® III Reverse Transcriptase (SSIII)在50℃进行逆转录，反应时间设置为5、15、30、45分钟。取1 μl cDNA为模板，用VazymeLAmp®  DNA Polymerase扩增Fibrillin基因10.0 kb或6.1 kb片段。

M. DL15000 Marker.

 

 

 

 

 

 

 

图4. 以1 μg HeLa细胞总RNA为模板，分别用HiScript® II Reverse Transcriptase和T品牌逆转录酶进行逆转录反应，时间设置为5 min。取1 μl cDNA为模板，用Vazyme LAmp® DNA Polymerase扩增FIB 6100 bp和Pole 7117 bp片段。

 

 

 

 

 

 

 

图5. 以1 μg- 1 pg HeLa细胞总RNA为模板，用HiScript® II Q RT SuperMix for qPCR (R222-01)做逆转录，取1 μl cDNA为模板，分别用AceQ® qPCR SYBR® Green Master Mix扩增B2M基因 (A) 和EGFR基因 (B)。

 

 

 

 

      产品描述在上一代的HiScript® Reverse Transcriptase的基础上，我们通过专利的体外分子进化技术，获得了一个全新的逆转录酶突变体-HiScript® II Reverse Transcriptase。其携带的多个点突变使得其热稳定性大幅提高，在50℃的半衰期超过240分钟，并可在55℃长时间反应而保持稳定，保证了具有复杂二级结构模板的逆转录成功率。同时，高温下保持的高活性能够带来更高的cDNA产量。同时，HiScript® II Reverse Transcriptase与模板的亲和力 (affinity)以及行进性 (processivity)大幅提高，表现为极强的cDNA持续合成能力。HiScript® II Reverse Transcriptase可从小鼠骨骼肌总RNA中逆转录获得创纪录的20.0 kb的cDNA (图2)，并且5分钟内的合成长度可达10 kb，非常适合快速逆转录反应。HiScript® II Reverse Transcriptase对于常见的逆转录抑制剂具有更好的耐受度。这些抑制剂通常是RNA提取试剂的组分，或者是来源于样品，在提取过程中会有不同程度的残留，并在逆转录时被引入，如异硫*酸胍、乙醇、木聚糖、EDTA、SDS、CTAB。与野生型的M-MLV (H-)以及其它逆转录酶相比，HiScript®II Reverse Transcriptase的杂质耐受度更高。这对于来源复杂的样品 (如FFPE组织)，或者富含多糖多酚的植物样品来说尤为重要。