无缝衔接dUTP/UDG防污染系统与一步法qRT-PCR

HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit

 

• Heat-labile UDG室温下迅速降解含U的双链DNA污染物

• Heat-labile UDG在55℃迅速彻底失活，维持cDNA的完整性

• 同HiScript® II One Step qRT-PCR Probe Kit具有相同的灵敏度

 

图1. 以Hela细胞总RNA为模板，用HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit (Q223) 扩增RFLPO 基因。由图可见，优化的dUTP浓度以及Heat-labile UDG使得扩增效率和灵敏度不会受到影响。相比之下，E.coli来源的UDG会严重影响one stepRT-qPCR的检测灵敏度。

 

      dUTP/UDG防污染系统是一种非常有效的控制PCR扩增产物污染的手段。在以DNA为模板的PCR检测试剂中，已逐渐成为了一种强制标准。不过，常用的E. coli UDG在通常的逆转录温度 (42-55℃) 下仍具有较高的活性，会降解cDNA，导致One Step RT-PCR/qPCR的灵敏度降低。HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit含有比例优化的dUTP/dNTP mix，并加入了来源于嗜冷海洋细菌的Heat-labile UDG。Heat-labile UDG在室温下具有很高的活性，在反应体系混合过程中即可充分降解含U的双链DNA污染物。当反应体系升温至50-55℃ (HiScript® II的最适反应温度) 时，Heat-labileUDG迅速彻底失活，维持cDNA的完整性，保证检测灵敏度不受影响。