β-葡萄糖苷酶（β-Glucosidase, β-GC）活性测定试剂盒说明书产品简介：β-GC（EC 3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC 负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC 水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC 能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。β-GC 分解对-*****-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-*****酚，后者在400nm 有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC 活性。试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。产品内容：提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：粉剂×2 瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入10mL 双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。试剂二：液体25mL×1 瓶，4℃保存。试剂三：液体50mL×1 瓶，4℃保存。操作步骤：一、样品的前处理：(1) 细菌或细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每400 万细菌或细胞加入400μL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30 次），15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。(2) 组织：称取约0.2g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆；15000g，4℃，离心20min，取上清，置冰上待测。二、测定操作表：试剂名称（μL） 对照管 测定管试剂一 400试剂二 500 500样本 100 100迅速混匀，放入37℃准确水浴30min 后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变）试剂一 400充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液上清液 500 500试剂三 1000 1000充分混匀，室温静置2min 后，用对照管调零，400nm 处测定吸光值Aβ-GC 活⼒单位的计算：标准条件下测定的回归方程为y=0.32x -0.0027；x 为标准品浓度（μmol/mL），y 为吸光值值。1、组织中β-GC 活力的计算:（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每小时产生1μmol 对-*****酚定义为一个酶活力单位。β-GC 活力（U /mg prot）＝(A+0.0027) ÷0.32÷反应时间（0.5h）÷蛋白浓度（mg/mL）=6.25×(A+0.0027)÷蛋白浓度（mg/mL）（2）按样本鲜重计算：单位的定义：每g 组织在反应体系中每小时产生1μmol 对-*****酚定义为一个酶活力单位。β-GC 活力（U /g 鲜重）＝(A+0.0027) ÷0.32÷反应时间（0.5h）÷样本鲜重（g/mL）=6.25×(A+0.0027) ÷样本鲜重（g/mL）2、细菌或培养细胞中β-GC 活力的计算:（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每小时产生1μmol 对-*****酚定义为一个酶活力单位。β-GC 活力（U /mg prot）＝(A+0.0027) ÷0.32÷反应时间（0.5h）÷蛋白浓度（mg/mL）=6.25×(A+0.0027)÷蛋白浓度（mg/mL）（2）按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1 万个细菌或细胞在反应体系中每小时产生1μmol 对-*****酚定义为一个酶活力单位。β-GC 活力（U/104 cell）= (A+0.0027) ÷0.32÷反应时间（0.5h）÷细菌或细胞密度（104/mL）=6.25×(A+0.0027)÷细菌或细胞密度（104/mL）SolarbioBeijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 010-56371210Fax: 010-56371281/82Http://www.solarbio.cn