一、粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备

收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200 万细菌或细胞加入400μL 提取液，超声波破

碎细菌或细胞（功率20%，超声3 秒，间隔10 秒。重复30 次）；8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置冰上

待测。

称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10 分钟，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

二、CAT测定操作

1、CAT 检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二（100 uL）中加入20mL 试剂一，充分混匀，作为工作液。

2、测定前将CAT 检测工作液37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴10min。

3、取1mLCAT 检测工作液于1mL 石英比色皿中，再加入35μL 粗酶液，混匀；室温下立即测定240nm 下

的初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。计算A=A1-A2

三、CAT活性计算：

1、血清（浆）CAT 活力的计算:

单位的定义：每升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1umol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT（U/L）＝反应总体积（1035ul）÷样本体积（35ul）÷反应时间（1min）÷H2O2 消光系数（43.6×10-3）

×A=678×A

2、组织CAT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT（U/mg prot）＝反应总体积（1035ul）÷样本体积（35ul）÷反应时间（1min）÷H2O2 消光系数

（43.6×10-3）×A÷蛋白质浓度（mg/mL）=678×A÷蛋白质浓度（mg/mL）

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT（U/g mass）＝反应总体积（1035ul）÷样本体积（35ul）÷反应时间（1min）÷H2O2消光系数（43.6×10-3）

×A÷样本鲜重（g/mL）=678×A÷样本鲜重（g/mL）

3、细菌或细胞中CAT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT（U/mg prot）＝反应总体积（1035ul）÷样本体积（35ul）÷反应时间（1min）÷H2O2 消光系数

（43.6×10-3）×A÷蛋白质浓度（mg/mL）=678×A÷蛋白质浓度（mg/mL）

3.2 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。

CAT（U/104 cell）＝反应总体积（1035ul）÷样本体积（35ul）÷反应时间（1min）÷H2O2 消光系数

（43.6×10-3）×A÷细胞密度（104 cell /mL）=678×A÷细胞密度（104 cell /mL）

 

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