葡萄糖氧化酶
英文名称: Glucose Oxidase
型号:null    产品货号: G-7141
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: sigma

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骤:
一、粗酶液提取:
1、细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每200 万细菌或细胞加入400μL 提取液,超声波破
碎细菌或细胞(功率20%,超声3 秒,间隔10 秒。重复30 次);8000g 4℃离心10 分钟,取上清,置冰上
待测。
称取约0.1g 组织,加入1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10 分钟,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
二、CAT测定操作
1、CAT 检测工作液的配制:用时在每瓶试剂二(100 uL)中加入20mL 试剂一,充分混匀,作为工作液。
2、测定前将CAT 检测工作液37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)水浴10min。
3、取1mLCAT 检测工作液于1mL 石英比色皿中,再加入35μL 粗酶液,混匀;室温下立即测定240nm 下
的初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。计算A=A1-A2
三、CAT活性计算:
1、血清(浆)CAT 活力的计算:
单位的定义:每升血清(浆)在反应体系中每分钟催化1umol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/L)=反应总体积(1035ul)÷样本体积(35ul)÷反应时间(1min)÷H2O2 消光系数(43.6×10-3)
×A=678×A
2、组织CAT 活力计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=反应总体积(1035ul)÷样本体积(35ul)÷反应时间(1min)÷H2O2 消光系数
(43.6×10-3)×A÷蛋白质浓度(mg/mL)=678×A÷蛋白质浓度(mg/mL)
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g 组织在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/g mass)=反应总体积(1035ul)÷样本体积(35ul)÷反应时间(1min)÷H2O2消光系数(43.6×10-3)
×A÷样本鲜重(g/mL)=678×A÷样本鲜重(g/mL)
3、细菌或细胞中CAT 活力计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/mg prot)=反应总体积(1035ul)÷样本体积(35ul)÷反应时间(1min)÷H2O2 消光系数
(43.6×10-3)×A÷蛋白质浓度(mg/mL)=678×A÷蛋白质浓度(mg/mL)
3.2 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1nmol H2O2 降解定义为一个酶活力单位。
CAT(U/104 cell)=反应总体积(1035ul)÷样本体积(35ul)÷反应时间(1min)÷H2O2 消光系数
(43.6×10-3)×A÷细胞密度(104 cell /mL)=678×A÷细胞密度(104 cell /mL)
 
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