Altered Sites® II Mammalian invitro Mutagenesis System

Q5590的产品组分
1 x10mg R408 Helper Phage DNA
1 x1ml R408 Helper Phage
1 x100u T4 DNA Ligase
1 x500u T4 DNA Polymerase
1 x75ml Anneal 10X Buffer
1 x100ml Synthesis 10X Buffer
1 x20mg pALTER®-MAX Vector
1 x500ml Bacterial Strain JM109
1 x200ml Bacterial Strain ES1301 mut S
1 x30ml Ampicillin Knockout Oligonucleotide
1 x30ml Ampicillin Repair Oligonucleotide
1 x30ml Chloramphenicol Knockout Oligonucleotide
1 x30ml Chloramphenicol Repair Oligonucleotide

Altered Sites® Ⅱ Mammalian Mutagenesis Systems (a, b, c)(Altered Sites® Ⅱ哺乳动物突变系统)提供了一种制备和筛选寡聚核苷酸介导的突变的高效方法。本系统提供的试剂可以突变双链(ds)或单链(ssDNA)DNA模板，并且无须亚克隆即可进行下一轮突变。无需亚克隆在哺乳动物细胞中表达序列也成为可能。本系统使用抗生素筛选的方法得到高频率突变。pALTER®-MAX Vector含有氨苄青霉素和氯霉素抗性基因，但是氨苄青霉素抗性基因是被失活的。在突变反应中，氨苄青霉素修复寡核苷酸和特异性突变核苷酸与DNA模板的同一个链退火杂交。接下来突变链的合成与连接使两个区域相连，从而使氨苄青霉素抗性恢复并导入了所需突变。在反应的初始阶段可以加入氯霉素敲除寡核苷酸，使氯霉素转乙酰酶基因失活，这样就可以进行下一轮突变和抗生素筛选，而无须亚克隆。

注意：本系统中不含有感受态细胞。

特点
  • 高效：得到所需突变几率可高达90%。还能同时获得多个突变。
  • 简便：使用双链DNA操作方法，不需要制备单链DNA。
  • 灵活：能同时产生多个突变、缺失或插入。无须亚克隆就可以在 
    同一个质粒上进行下一轮突变和筛选。

操作手册   Technical Manual TM041

储存条件：细菌菌株储存于-70℃；其它组分储存于-20℃。