产品背景：

体外同源重组技术是一种方便、快捷、高效的PCR重组试剂盒。它能够将任何PCR产物克隆连接到任何线性化的表达载体中。PCR引物需带有30个与插入载体末端序列相同的同源臂，其片段可由Taq DNA聚合酶或者其他高保真DNA聚合酶扩增获得。线性化的载体可以通过PCR或者限制性酶切（单酶切或双酶切）的方法获得。每个反应体系需要在室温下孵育5min，之后冰置10min。PCR产物就能够快速而且准确的与载体发生同源重组从而相连接。

产品组成：

5×buffer（25次）	25μl
酶	25μl
线性化载体（阳性对照）	5μl
500bpPCR片段（阳性对照）	5μl
感受态细胞	25支
说明书	1

特点：

• 本产品可将任何片段克隆至任何载体的任何位点上。
• 克隆过程方便，快速，结果精确，高效，阳性克隆＞95%。
• 不需限制酶、***酸酶和连接酶
• 克隆的PCR片段长度最长可达10kb

操作步骤:
1． 引物设计

PCR引物整体约30-35个碱基，从5’到3’端依次由载体、酶切位点和插入基因相应的基因序列组成。

引物设计方法：

（引物设计要点！）

1) 确定载体末端的15个碱基序列。

2) 引物的 5末端附加上述的15个碱基。

2．反应体系

线性化载体（50-150ng/μl ）                                   1μl

纯化的PCR片段                                             nμl

10×Buffer                                                   1μl

酶                                                          1μl

d H2O                                                  up to 10μl

PCR片段与载体的摩尔比为6:1

阳性对照体系

阳性载体                                                   1.5μl

PCR片段                                                   1.5μl

10×Buffer                                                 1μl

酶                                                               1μl

d H2O                                                        5μl

注意事项：
1． 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2． 避免反复化冻。
3． 避免移液枪吹吸。
4． 整个操作过程要轻柔。

产品应用:

• 将PCR产物克隆至任何载体
• 将目的基因从一个载体克隆至目的载体
• 可在插入片段之前或之后添加一个接头，连接子或者标签
• 全基因合成
• 高扩增量克隆

保存条件：

感受态细胞保存于-80℃，其余组分保存于-20℃。

定购信息:

货号	品名	规格
A-1002-12	A&D 菌体外基因克隆试剂盒	12 次
A-1002-25	A&D 菌体外基因克隆试剂盒	25 次
A-1002-50	A&D 菌体外基因克隆试剂盒	50 次
A-1002-100	A&D 菌体外基因克隆试剂盒	100 次

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