产品背景：
体外同源重组技术是一种方便、快捷、高效的PCR重组试剂盒。它能够将任何PCR产物克隆连接到任何线性化的表达载体中。PCR引物需带有30个与插入载体末端序列相同的同源臂，其片段可由Taq DNA聚合酶或者其他高保真DNA聚合酶扩增获得。线性化的载体可以通过PCR或者限制性酶切（单酶切或双酶切）的方法获得。每个反应体系需要在室温下孵育5min，之后冰置10min。PCR产物就能够快速而且准确的与载体发生同源重组从而相连接。
产品组成：
5×buffer（50次） | 50μl |
酶 | 50μl |
线性化载体（阳性对照） | 5μl |
500bpPCR片段（阳性对照） | 5μl |
感受态细胞 | 50支 |
说明书 | 1 |
- 本产品可将任何片段克隆至任何载体的任何位点上。
- 克隆过程方便，快速，结果精确，高效，阳性克隆＞95%。
- 不需限制酶、***酸酶和连接酶
- 克隆的PCR片段长度最长可达10kb
1． 引物设计
PCR引物整体约30-35个碱基，从5’到3’端依次由载体、酶切位点和插入基因相应的基因序列组成。
引物设计方法：
（引物设计要点！）
1) 确定载体末端的15个碱基序列。
2) 引物的 5末端附加上述的15个碱基。
2．反应体系线性化载体（50-150ng/μl ） 1μl
纯化的PCR片段 nμl
10×Buffer 1μl
酶 1μl
d H2O up to 10μl
PCR片段与载体的摩尔比为6:1
阳性对照体系
阳性载体 1.5μl
PCR片段 1.5μl
10×Buffer 1μl
酶 1μl
d H2O 5μl
注意事项：
1． 刚刚化冻的细胞，转化效率最高。
2． 避免反复化冻。
3． 避免移液枪吹吸。
4． 整个操作过程要轻柔。
产品应用:
- 将PCR产物克隆至任何载体
- 将目的基因从一个载体克隆至目的载体
- 可在插入片段之前或之后添加一个接头，连接子或者标签
- 全基因合成
- 高扩增量克隆
感受态细胞保存于-80℃，其余组分保存于-20℃。
定购信息:
货号 品名 规格 A-1002-12 A&D 菌体外基因克隆试剂盒 12 次 A-1002-25 A&D 菌体外基因克隆试剂盒 25 次 A-1002-50 A&D 菌体外基因克隆试剂盒 50 次 A-1002-100 A&D 菌体外基因克隆试剂盒 100 次
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