产品信息

产品描述

Hieff NGS^TM mRNA Isolation Master Kit是翊圣生物自主研发的专门用于纯化mRNA的磁珠试剂盒。其中的mRNA Capture beads为偶联了Oligo（dT）的微米级顺磁性微球，通过与带有poly（A）尾巴的mRNA相结合，将mRNA从0.1-4 μg完整度良好的总RNA中进行分离纯化。

产品组分

运输与保存方法

冰袋运输。2-8℃保存，效期一年。避免冷冻！

使用方法

一、自备材料

磁力架，Nuclease-free离心管。

二、操作流程

图1 mRNA纯化试剂盒操作流程 

一、 操作步骤

3.1 实验前准备

将mRNA Capture Beads从4℃取出，静置使其温度平衡至室温（约30 min）。

3.2 样本准备

在一个Nuclease-free PCR管中，用Nuclease-free water将0.1-4 μg总RNA稀释至50 μL，冰上放置备用。

3.3 mRNA与磁珠的结合

① 颠倒或涡旋振荡混匀磁珠，吸取50 μL磁珠悬液加入至50 μL 的RNA样品中，用移液器反复吹打6次，

使其充分混匀。

② 将磁珠与RNA的混合物置于PCR仪中，65℃，5 min；4℃，hold，使得RNA变性。

③ 室温孵育5 min，使mRNA与磁珠完全结合。

④ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，使mRNA与总RNA分离，小心移除上清。

3.4 样本的洗涤

① 将样品从磁力架上取出，加入200 μL Beads Wash Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

② 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。

③ 重复上一步骤，共洗涤两次。

3.5 mRNA样本第一轮洗脱

① 将样品从磁力架上取出，加入50 μL Tris Buffer重悬磁珠，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

② 将样品放置于PCR仪中，80℃，2 min；25℃，hold，将mRNA洗脱下来。

3.6 mRNA与磁珠的再次结合

① 加入50 μL Beads Binding Buffer，用移液器反复吹打6次以彻底混匀。

② 室温孵育5 min，使mRNA结合到磁珠上。

③ 将样品置于磁力架中，室温静置5 min，小心移除上清。

3.7 样本的洗涤

将样品从磁力架上取出，加入Beads Wash Buffer，用移液器反复吹打6次彻底混匀，将样品重新放回至磁力架中，室温静置5 min，然后吸除全部上清。

【注】：最后需要用10 μL移液器吸干净残留液体。

3.8 mRNA样本终洗脱

方案一：用于逆转录反应。

将样品从磁力架上取出，加入12 μLNuclease-free water重悬磁珠，用移液器吹打6次以彻底混匀。将样品置于PCR仪中80℃，2 min后，立即置于磁力架上，室温静置5 min。待溶液澄清后，小心吸取10 μL上清至另一新的Nuclease-free PCR管中。

方案二：用于RNA文库的构建。

可根据相关试剂盒说明书加入相应体积的Frag/Primer Buffer，进行文库构建。

【注】：样品可置于冰上继续进行NGS文库构建或其他分析应用（建议立即进行后续反应），也可以置于-80℃保存。

注意事项

1）磁珠使用前务必要回温至室温，并充分混匀，否则可能影响样品的回收效率。

2）操作过程要严格保证无RNase酶和核酸污染。

3）本产品和其他试剂配套使用时，请按照具体实验说明来进行操作。

4）想要获得好的纯化效果，需要有完整度良好的总RNA，确保RIN值在7.0及以上。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。