Lipofectamine2000转染试剂是一种多用途转染试剂，可在各种贴壁和悬浮细胞系中提供高效转染。研究人员可使用Lipofectamine® 2000试剂进行基于siRNA和shRNA的基因敲除实验及基因表达研究。Lipofectamine® 2000是Life Technologies提供的用于siRNA和质粒DNA共转染的最佳试剂。LIPOFECTAMINE2000试剂为大多数细胞系提供了最高的转染效率（表达转染基因细胞的百分数）和活性（细胞抽提物中转入基因的酶产物活性）。当存在血清或用于进行蛋白表达的细胞系（如COS-7，CHO和293）时，LIPOFECTAMINE2000尤为有效，效率可超过90%。两个关键性特点使得LIPOFECTAMINE2000试剂的转染步骤快速简便：（1）DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，以及（2）转然后不需要除去LIPOFECTAMINE2000试剂。对于96孔板培养，不再需要提前一天进行细胞铺板，而可以直接在平板中制备复合物，然后将细胞悬浮液加入到复合物就可以了，这样进一步减少了转染时间。这种改进步骤已经过293-H,293-F,COS-7L和CHO细胞的试验，同传统方法相比活性稍低。快捷的步骤和蛋白表达细胞系的高效转染使得LIPOFECTAMINE2000非常适用于96孔板的高通量转染，比如cDNA文库的筛选和蛋白瞬时表达。对于大多数阳离子脂质体试剂，应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。使用小剂量确定的优化条件可以用于进行大剂量的转染，只要根据培养板表面比例线性增加铺板细胞的数目，阳离子脂质体试剂和DNA量就可以了。

采用Lipofectamine® 2000试剂，您可以实现：

• 在各种细胞系中具有卓越的转染效率和高重组蛋白表达水平 (表1)

• 出众的siRNA和质粒DNA共转染性能

• 在血清存在时亦具有可靠的转染效率 – 转染后无需更换培养基

• 适用于高通量应用的可靠性能

• 建立稳定细胞系的最佳选择


适用于基因表达和基因沉默的高性能转染试剂

Lipofectamine® 2000试剂适合所有常见细胞系及许多难以转染的细胞系，可用于含有或不含血清的培养基。在基因沉默应用中，Lipofectamine® 2000试剂的高效转染提供了很高的基因敲除水平，足以获得令人信服的结果。Lipofectamine® 2000试剂可实现siRNA和质粒DNA的高效转染，它是共转染的首选试剂。Lipofectamine® 2000试剂使用方便 – 只需将其与核酸混合，加入细胞培养物即可。


适合高通量操作

Lipofectamine® 2000试剂使用简单、快速且具有很高的转染效率，适用于瞬时蛋白表达或高通量RNAi转染。在上述应用中，可轻松建立自动化或机器人系统转染条件。如需了解有关Lipofectamine® 2000的实验方案、文献引证及其它产品信息，可登录细胞系数据库。

仅供研究使用。不得用于人或动物的治疗或诊断。

 

LIPOFECTAMINE 2000 转染试剂转染步骤

此实验步骤设计用来进项24孔板贴壁细胞的瞬时或稳定转染，其为设计用来在生长培养基中直接加入复合物。

1.转染前一天，胰酶消化细胞并技术，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在0.5ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。参见索莱宝公司制表6了解建议的细胞密度

2.对于每孔细胞，使用50ul无血清培养基（如：OPTI-MEMI培养基）稀释0.8ug-10.ugDNA.多空操作可以批量制备。

3.对于每孔细胞，使用50ulOPTI-MEMI培养基稀释1ul-3ul LIPOFECTAMINE2000试剂。LIPOFECTAMINE2000稀释后，在30分钟内同稀释的NDA混合。保温时间过长会降低活性。可以批量制备。注意：即使LIPOFECTAMINE2000使用OPTI-MEMI稀释，细胞也可以使用D-MEM培养基。如果D-MEM作为LIPOFECTAMINE2000的稀释液，在5分钟内同稀释的DNA混合。

4.混合稀释的DNA（由第2步）和稀释的LIPOFECTAMINE2000(由第3步)。在室温保温20分钟。注意：溶液可能会浑浊，但不影响转染。复合物可以在室温保持6小时稳定。

5.直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀。注意：如果在无血清条件下转染，使用含血清的正常生长培养基进项细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基，替换为0.5ml无血清培养基。

6.在37℃，5%的CO2种保温24-48小时。无须取代哦复合物或更换培养基。或者在4-5小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。

7.在细胞中加入复合物24-72小时后，分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达，在开始转染一天后讲细胞传代至新鲜培养基中，2天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。

Solarbio table 6
Cell line	Cills/well（×105）	Lipofectamine2000reagent（ul）
CHO-S	1.5	2.5-3.0
COS-7L	0.8	2.5-3.0
293H,293F	2.0	1.5-2.0