pTARGET^TM Mammalian Expression Vector System

A1410的产品组分

1 X1.2ug      pTARGET™ Vector

1 X12ul        Control Insert DNA

1 X200ul      T4 DNA Ligase 10X Buffer

1 X100u        T4 DNA Ligase

6 X200ul      JM109 Competent Cells, High Efficiency

说明: pTARGETTM Mammalian Expression Vector System (a,b,c)(pTARGETTM哺乳动物表达载体系统)是一个在哺乳动物细胞中便于克隆PCR产物并将其表达的系统。此载体是通过EcoRV酶切pTARGETTM载体，并在两个3`末端加入胸腺嘧***构建的。插入位点单个3`-T的突出端在两方面极大提高了PCR产物与质粒连接的效率。第一，3`-T突出端可以防止载体的自身环化；第二，为某些热稳定性聚合酶产生的的PCR产物提供一个匹配的突出端(1,2)。这些聚合酶常常以模板不依赖模式在扩增产物的3`端加上一个脱氧腺苷酸(3,4)。pTARGETTM载体还包含一段经过修饰的β半乳糖苷酶的α肽编码区，从而使重组子也能使用蓝/白筛选。

pTARGETTM载体带有人巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)即刻早期增强子/启动子区域，能启动克隆DNA的插入片段在哺乳细胞中组成型表达。此载体还含有新霉素***酸转移酶基因，是哺乳动物细胞的一个筛选标记。pTARGETTM载体使用抗生素G-418筛选转染细胞，能用于瞬时表达或稳定表达。

特点

  • 简单的PCR克隆: "T" 突出端允许热稳定性酶如Taq DNA聚合酶生成的PCR产物直接进行连接反应。

  • 强组成型表达: CMV增强子/启动子区域可以在许多细胞类型中进行强组成型表达。在转基因小鼠中，28个检测的组织中有24 个能观察到CMV增强子/启动子调控的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase, CAT)基因的表达(5)。此载体在细胞中以游离体形式表达SV40大T抗原（SV40 large Tantigen），能获得更高的表达水平。

  • 蓝/白斑筛选: 重组子克隆易于筛选。单酶切就能除去插入DNA。

  • 稳定的转染子: pTARGETTM 载体含有新霉素***酸转移酶基因，能筛选稳定的转染子。

操作手册 Technical Manual          TM044

储存条件: 感受态细胞储存于–70°C；其它组分储存于–20°C或–70°C。

参考资料

1. Mezei,L.M.and Storts,D.R.(1994)In:PCR Technology:Current Innovations,Griffin,H.G.and Giffin,A.M.,eds.,CRC Press,Boca Raton,FL,21.

2. Robles,J.and Doers,M.(1994) Promega Notes 45,19-20

3. Clark,J.M.(1998) Nucl.Acids Res.16,9677-86

4. Newton,C.R.and Graham,A.(1994)In:PCR,BIOS Scientific Publishers,Ltd.,Oxford,UK,13.

5. Schmidt，E.V.et al.(1990)Mol.Cell.Biol.10,4406-11

技术资料                                          

PCR Cloning System Brochure    BR141

Promega Notes                              PN058,PN082