| HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶 英文名称： HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 型号:null 产品货号： 11105ES92 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 品牌: yeasen | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase逆转录酶 产品信息
产品描述 HieffTM M-MLV (H-) Reverse Transcriptase是通过点突变技术得到的RNase H活性缺失的逆转录酶。野生型的M-MLV包含RNase H活性，该活性可催化降解DNA/RNA杂合体中的RNA，因而在cDNA第一条链的合成过程中可能会降解DNA/RNA杂合体中的模板RNA，影响cDNA合成长度和得率。与野生型M-MLV相比，HieffTM M-MLV (H-)的扩增能力增强，可扩增长达10 kb的cDNA。此外，其热稳定性大幅度提高，可耐受高达42℃的反应温度，适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。 产品组分
产品应用 全长cDNA文库构建；终点法PCR；实时定量PCR等。 活性定义 以Poly(A) .Oligo(dT)为模板-引物，在37℃，10 min内，将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。 质量控制 核酸外切酶残留检测：200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。 核酸内切酶残留检测：200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA，37℃下孵育1 h，DNA的电泳谱带不发生变化。 RNase残留检测：200 U本酶和1 μg小鼠肝脏总RNA，37℃下孵育1 h，RNA电泳谱带不发生变化。 运输与保存方法 冰袋运输。-20 ℃保存。 注意事项 1）请保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用耗材均需保证RNase free，以防止RNase污染； 2）所有操作均应在冰上进行，防止RNA降解； 3）为保证高效率逆转录，建议使用高质量的RNA样本； 4）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。 第一链cDNA合成操作步骤 1. RNA变性（此步为可选步骤，RNA变性有助于打开二级结构，可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。）
65℃加热5 min，迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后加入下表中的逆转录反应液，并用移液器轻轻吹打混匀。 2. 逆转录反应体系配制（20 μL体系）
3. 逆转录程序设置
【注】：1）当使用Random Primers时，需25℃，孵育5 min；若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers，此步可省略； 2）逆转录温度：推荐使用42℃； 3）85℃加热5 min，目的是使逆转录酶失活。 ※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应，也可-20℃短期保存，若需长期保存，建议分装后，于-80℃保存，避免反复冻融。 相关产品
HB170619 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||