本试剂盒采用miRNA 3′末端多聚A尾Poly(A)。再使用Oligo(dT)-Universal Tag通用逆转录引物进行逆转录反应,最终生成miRNA对应的cDNA第一链。
miRcute miRNA cDNA第一链合成试剂盒包含miRNA3′末端Poly(A)修饰过程和逆转录过程的所有试剂,该试剂盒具有高效的Poly(A)修饰和逆转录效率,可以从20pg -2ug的Total RNA中有效制备miRNA对应的cDNA第一链。
注:该试剂盒与BioTeke miRNA荧光定量检测试剂盒配套使用。
注意事项:
预防Rnase污染,应注意以下几个方面:
1:经常更换新手套,因为皮肤经常带有细菌,可能导致Rnase污染。
2:使用无Rnase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3:RNA在裂解液中不会被Rnase降解,但提取后继续处理过程中应使用不含Rnase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除Rnase。
4:配制溶液应使用Rnase-Free的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(v/v),放置过夜,高压灭菌)。TRIS溶液可用RNAsafe(RP1901)去除Rnase。