T4噬菌体DNA连接酶

产品     编号 规格 价格

 T8400-100 100u 535.00 

说明：T4噬菌体DNA连接酶主要催化两条DNA链上相邻的5’*** 

 酸基和3’-羟基之间形成***酸二酯键。它的主要用途是连接 

 带匹配粘端的DNA分子，或使平端的双链DNA分子互相连接

 或与合成接头相连接。也可催化DNA与RNA之间以及少数

 RNA之间的连接，但不能催化单链DNA之间的连接。

单位定义：0.01Weiss单位的T4 DNA连接酶可以在16℃下反应

 20分钟，连接95％的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。

注意：一个Weiss单位的T4 DNA连接酶相当于核酸外切酶测定

 中的0.2单位或60个粘性末端(New England Biolabs)

存储缓冲液：10mM Tris-HCl(pH7.5 25℃),50mM KCl，

 1mM DTT，0.1mM EDTA和50％glycerol。

10×反应缓冲液：300mM Tris-HCl(pH7.8 25℃), 

 100mM MgCl2，100mM DTT，10mM ATP

质量控制：

 1 活性：大于3Weiss单位/微升。

 2 蓝白克隆鉴定：12Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内

 切酶酶切产生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下，反应16

 小时后转化到大肠杆菌JM109培养，白色菌落小于总菌落

 数的2％；12 Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内切酶酶

 切产生的钝性末端DNA在4℃下，反应16小时后转化到大

 肠杆菌JM109培养，白色菌落小于总菌落数的5％。

 3 核酸内切酶测定：20Weiss单位酶与1μg超螺旋质粒

 DNA在37℃下反应16小时，DNA的电泳图谱不发生变化。

 4 单链和双链DNase测定：20Weiss单位酶与50ng同位素

 标记的单链或双链DNA反应16小时，单链DNA的释放量

 小于2％，双链DNA的释放量小于1％。

 5 RNase测定：37℃时，20Weiss单位酶与50ng 3H-RNA

 保温5小时，释放量小于1％。

 6 蛋白纯度：SDS PAGE 检测纯度≥90％。

储存条件：−20℃