2×HieffTMPCR Plus Master Mix (With Dye)
英文名称: 2×HieffTMPCR Plus Master Mix (With Dye)
型号:null    产品货号: 10105ES03
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: yeasen

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格

2×HieffTMPCR Plus Master Mix (With Dye)

10105ES03

1ml

60.00

2×HieffTMPCR Plus Master Mix (With Dye)

10105ES08

5×1ml

270.00

产品描述

  2×HieffTM PCR Plus Master Mix (With Dye)包含Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,大大简化实验的操作步骤,提高了高通量操作和实验结果的重现性。Mix中含有电泳缓冲液和染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便。体系中加入的保护剂使得 Master Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A,可轻松克隆至T载体。
产品信息

 

 

 

产品编号/规格

10105ES03(1 ml)

10105ES08(5×1ml)

HieffTM PCR Plus Master Mix (With Dye)

1ml

5×1ml

超纯水(PCR Grade

1ml

1ml

 

运输与保存方法
冰袋(wet ice)运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸外内酶残留检测:20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时, DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中,以ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测:50 μl体系中,以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,观察到单一的1 Kb条带。

 应用实例

1.        反应体系配制(50μl):

模板DNA§

optional

引物110 μM

2 μl

引物210 μM

2 μl

2×HieffTM PCR Plus Master Mix (With Dye)

25μl

ddH2O

up to 50μl

§ 针对不同模板的最佳反应浓度有所不同,下表为50μl反应体系推荐模板使用量,仅供参考。

人基因组DNA

0.11 μg

大肠杆菌基因组DNA

10100 ng

λDNA

0.55 ng

质粒DNA

0.110 ng

2.        PCR循环反应条件

94

5 min(预变性)

94

30 sec

35个循环

55*

30 sec    

72

30 sec

72

7 min(彻底延伸)

退火温度需要根据引物的Tm值调整,一般设置成低于引物Tm1-2即可。

注意事项
1. 操作注意事项
由于Taq Plus DNA Polymerase室温下也有一定的反应活性,PCR反应体系配制需在冰上进行。体系混匀后快速置于PCR仪进行反应。这样可以减少反应准备阶段的非特异扩增,有助于得到更好的PCR结果。
2. 引物设计注意事项
2.1 引物3’端最后一个碱基选择C或G;
2.2 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;
2.3 引物3’端尽量避免发卡结构的出现;
2.4 引物Tm值控制在55℃-65℃之间;
2.5 引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;
2.6 引物GC含量控制在40%-60%之间;
2.7 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。