Rosseta(DE3)感受态细胞

 产品信息

产品名称	产品编号	规格	储存
Rosetta(DE3) Competent Cell Rosseta(DE3)感受态细胞	11806YB80	10×100 μl	-80℃保存

 

 Rosseta(DE3)感受态细胞产品描述

本品是在具有大肠杆菌BL21菌株基础上制备的化学转化感受态细胞，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA）对应的tRNA，提供外源基因（尤其是真核基因）在原核系统中的表达水平。经pUC19质粒检测，转化效率可达10⁷ cfu/μg。

本品具有氯霉素抗性。

 Rosseta(DE3)感受态细胞产品组分

编号	组分	规格及货号
11806-A	Rosetta(DE3) Competent Cell	100 μl × 10
11806-B	pUC19（0.1 ng/μl）	5 μl × 1

运输和保存方法

干冰运输。

Rosseta(DE3)感受态细胞于-80℃保存，pUC19质粒≤-20℃保存。有效期半年。

 Rosseta(DE3)感受态细胞注意事项

1）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用，避免反复冻融。

2）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。

3）为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。

4）本品应于-80℃保存，请勿将感受态细胞储存于-20℃或液氮中保存。

5）整个转化过程请于无菌条件下操作。

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。

2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。

【注】：① 通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和；

② 待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。

3）42℃水浴，不要晃动，准确热激45s后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。

4）向离心管中加入900 μl 不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。

5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。

6）取适量已转化细胞，加到含相应抗生素的固体培养基上，轻轻涂匀。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。

【注】：如菌体量较少，也可2,500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。

7）室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。