2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye) 产品描述

  2×Hieff^TM Long PCR Master Mix (With Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’→5’外切酶活性（校对活性）的蛋白组成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合独特的缓冲体系，Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。
Mix中含有电泳缓冲液和溴酚蓝染料，可在反应结束后直接进行电泳，使用方便。其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。
 2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye) 产品组分

 

 

组 分	产品编号/规格
	10108ES03(1 ml)	10108ES08（5×1 ml）
2×HieffTM Long PCR Master Mix (With Dye)	1ml	5×1ml
超纯水（PCR Grade）	1ml	5×1ml

 

 2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye) 运输与保存方法
冰袋（wet ice）运输。收到产品后放到-20 ºC保存。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 ºC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
 2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye) 功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 Kb条带。

 

 2×Hieff™ Long PCR Master Mix (With Dye)  应用实例

人基因组DNA	0.1～1 μg
大肠杆菌基因组DNA	10～100 ng
λDNA	0.5～5 ng
质粒DNA	0.1～10 ng

2.        PCR反应条件设置：

目的片段＜5 kb

	30 sec/kb
72℃	7 min（彻底延伸）

*退火温度需要根据引物退火温度调整，一般设置成低于引物退火温度1-2℃即可。

目的片段＞5 kb

94℃	1-3 min(预变性)
94℃	10 sec	35个循环
68℃*	30-60 sec/kb
68℃	7 min（彻底延伸）

*对于> 5 kb的片段，推荐使用长引物，Tm值在68-70℃，把退火/延伸温度合并为68℃。这样可以显著提高扩增特异性。延长延伸时间有助于提高扩增产量。