内皮细胞层是血液和其它组织的天然屏障。内皮细胞功能病变是造成动脉粥样硬化的主要原因。内皮细胞同时会合成和分泌凝血和纤维蛋白溶解系统的增强和抑制物，以及影响血小板粘附和聚集的媒介物。它们同时也会分泌控制细胞增殖的蛋白来维持血管壁的健康。内皮细胞会分泌t-PA和PAI-1等抗血栓因子以及响应TNF-α，继而分泌细胞因子GM-CSF，表达ICAM-1表面抗体，产生大量的一氧化氮和endothelin。原代动脉内皮细胞的体外培养系统有助于在特定的体外条件下研究血管内皮细胞的功能。

 

细胞特性

1）来源：新生小鼠动脉

2）含量：>5x105 个/mL

3）鉴定：第VIII因子（Von Willebrand factor）特异性抗体免疫荧光法

4）纯度：>90%

5）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

6）规格：1mL冻存管包装

 

运输和保存：干冰运输，收到后立即液氮冻存。

细胞使用：仅供科研使用。

 

细胞培养步骤

 

1）准备完全培养基：ECM内皮培养基(Sciencell)+10%FBS+1%P/S，细胞因子：ECM内皮因子（1：100）+4uM/ml L-Glu+90U/ml肝素。

2）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在370C水浴中迅速振荡解冻，加入9mL 完全培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养液后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含有5mL完全培养基、胶原包被的T-25培养瓶中静置培养（切勿移动）。48小时后换液并检查细胞密度。

3）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，既可进行传代培养：

1.弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，放于37℃培养箱中反应1-2分钟，然后在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3.按3ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL完全培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5mL完全培养基的胶原包被的T-25培养瓶中。

 

注意事项： 

1. 收到细胞后，若发现冻存管瓶盖脱落、破损或已融化及细胞有污染，请及时与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。