英文名称： Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, for Adhesion and Migration
HB170317
Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, for Adhesion and Migration
3D细胞培养水凝胶（促粘附与迁移型）
产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格（元） |
| Peptide Hydrogel Suitable for 3D Cell Culture, for Adhesion and Migration 3D细胞培养水凝胶（促粘附与迁移型） | 40135ES08 | 5 ml | 2-8℃ |
1256.00 |
产品描述
Yeasen多肽水凝胶系列产品是一种人工合成的多肽类生物纳米材料，由1%（w/v）的合成多肽及99%的水组成，在适当条件下，可自组装成纳米级的纤维状结构，平均孔径为50~200nm，形成与天然细胞外基质（ECM）相似的具有网状立体结构的水凝胶支架，能够为细胞的粘附、迁移、增殖和分化提供更接近体内的外环境。
Yeasen多肽水凝胶系列产品成分明确，无动物异源蛋白和病原体，有效避免了不确定成分对细胞生长的损害或产生其他不利影响。该水凝胶具有良好的生物相容性和可降解性，降解产物为天然氨基酸，对细胞无毒无害，具有极好的生物相容性；肽段水凝胶产品外观呈透明状，易于对细胞生长状态进行观察与研究，操作方便。
Yeasen促粘附与迁移型3D细胞培养水凝胶，通过改变多肽的序列，使其更加有利于细胞的粘附和迁移。
运输和保存方法
冰袋运输。2-8℃保存，效期2年。
注意事项
1）与本产品有关的操作务必在无菌条件下进行 。
2）3D细胞培养水凝胶原液浓度为1%（w/v），根据细胞培养需要可以在0.1%～1%(w/v)浓度范围内进行稀释。实验表明，浓度为0.25%的水凝胶适用于绝大多数类型细胞的3D培养；浓度小于0.25%的水凝胶适用于方案A进行3D细胞培养。
3）本产品与细胞培养液接触后即启动了不可逆的凝胶化过程，因此，在使用之前，勿将细胞培养液或生理盐水与本产品有任何接触。此外，凝胶成型后严禁再进行混合操作及其它可能破坏凝胶结构的操作。
4）本产品凝胶化过程一般需要30～60分钟，所用水凝胶工作液的浓度越高，凝固时间越短，0.5%水凝胶工作液在30分钟内就可以完全凝固，0.15%～0.25%的低浓度水凝胶工作液，凝固时间须适当延长至60分钟。
5）如果采用3D细胞培养方式，细胞接种操作尽量快速，减少操作过程中水凝胶溶液酸碱度和渗透压对细胞的影响。
6）如果后续实验需要进行免疫染色，则进行3D细胞培养时需要添加一个培养孔作为抗体染色的对照组，以便评估第二抗体的非特异背景色。
7）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
所需缓冲液
1）20%蔗糖溶液：称取10 g蔗糖，溶于50 mL去离子水。用0.2μm滤器过滤除菌，备用。
使用方法
以下提供3种细胞培养方案供您参考：
（一）适用于嵌套式3D细胞培养皿（Transwell或Insert）的3D细胞培养
1. 水凝胶预处理：将水凝胶原液用超声波水浴锅(或涡旋震荡仪)于室温下处理30分钟，以降低水凝胶原溶液的粘性。如振荡过程中产生气泡，可将本产品离心处理(1500g，5分钟)。
2. 水凝胶工作液(2×)制备：将1%水凝胶原液、20%无菌蔗糖原液和去离子水按表1中比例配制成2×水凝胶工作液，其中蔗糖溶液终浓度为10%(w/v)。
表1 ：不同浓度2×水凝胶工作液的配制比例关系
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| 2×水凝胶工作液(1.0%)100μL | 2×水凝胶工作液(0.5%)100μL | (0.25%)100μL | 2×水凝胶工作液(0.125%)100μL |
| 1% 水凝胶原液 | 100 | 50 | 25 | 12.5 |
| 20%无菌蔗糖原液 | 0 | 50 | 50 | 50 |
| 无菌去离子水 | 0 | 0 | 25 | 37.5 |
【注】可根据实际需要量，配制不同体积或浓度的水凝胶工作液。
3. 细胞工作液(2×)制备：细胞经胰蛋白酶消化后，离心(250g)收集，弃上清液，将细胞重悬在5mL 10%无菌蔗糖工作液中。再次离心收集细胞，弃上清；取适量细胞(参考浓度为1~2×106 cells/mL)用10%无菌蔗糖工作液重悬，配制成2×细胞工作液。
4. 3D细胞培养皿（或Transwell）预处理：将3D细胞培养皿置于培养板的孔中，参照【表2】将一定体积的细胞培养液加入到3D细胞培养皿（或Transwell）底部作为下层细胞培养液，润湿3D细胞培养皿（或Transwell）内膜。
表2：不同品牌3D细胞培养皿水凝胶和细胞培养液的适用量
| 品牌 | 培养板规格 | 单孔底面积（cm2） | 下层细胞培养液加入量（μL） | 混合工作液加入量(μL ) | 上层细胞培养液加入量(μL ) |
| BD Falcon Cell Culture Inserts | 0.3 | 250 | 100 | 400 | |
| Corning® Transwell | 24孔 | 0.3 | 300 | 75 | 200 |
| Millipore Millicell Cell Culture Inserts | 24孔 | 0.3 | 250 | 150 | 500 |
以下操作请尽快完成，动作轻柔，避免产生气泡。
5. 水凝胶-细胞混合液制备：将步骤3配制的2×细胞工作液和步骤2配制的2×水凝胶工作液按照1：1的体积比进行混合，可用移液器上下吹打，注意轻柔，避免产生气泡。
6. 细胞接种：参考表2将一定体积的水凝胶-细胞混合工作液轻轻加入到3D细胞培养皿（或Transwell）中；用200μL 移液器将细胞培养液沿着3D细胞培养皿（或Transwell）边缘轻轻注入到水凝胶-细胞混合液上部，作为上层细胞培养液。
7. 细胞培养：将步骤6制备的载有3D细胞培养皿的细胞培养板（或Transwell）置于二氧化碳培养箱中进行培养；培养10 min后，小心地用200μL 移液器更换2/3～3/4体积的新鲜细胞培养液，30 min内更换两次培养液即可。如果细胞培养液中含有酚红指示剂，其颜色将由淡黄色（偏酸性）转为红色(偏中性)；为了更好地促进细胞生长，建议每2天更换一次新鲜细胞培养液，更换时应小心操作，以免破坏胶体结构。
（二）适用于常规细胞培养板的3D细胞培养
1. 按方案（一）中所述的步骤1～3、5操作。
2. 细胞接种：将水凝胶-细胞混合液加入到细胞培养板孔中，实验时应小心操作，以免产生气泡；将细胞培养液沿着细胞培养板孔边缘轻轻注入到水凝胶-细胞混合液上部。
3. 后续操作同方案（一）中的步骤7。
（三）适用于常规细胞培养板的2D细胞培养
1. 按方案（一）中步骤1所述方法对水凝胶进行预处理。
2. 水凝胶工作液制备：根据实验需求，将水凝胶原液用无菌去离子水稀释到所需浓度(参考范围0.25%～1%)，配制成水凝胶工作液。
3. 水凝胶包被细胞培养板：将一定体积(用量参考表3)的水凝胶工作液注入到细胞培养板孔中，实验时应小心操作，以免产生气泡；将细胞培养板置于二氧化碳培养箱中静置15 min；取出细胞培养板，沿着细胞培养板孔的边缘小心缓慢地注入3倍水凝胶工作液体积的细胞培养液(用量参考表3)，然后将细胞培养板置于二氧化碳培养箱中孵育30～60 min；凝胶成型后，小心地用200μL 移液器更换2/3～3/4体积的新鲜细胞培养液；再将细胞培养板置于二氧化碳培养箱30 min后，重复更换2/3～3/4体积的新鲜细胞培养液(共更换两次)；如果细胞培养液中含有酚红指示剂，其颜色将由淡黄色(偏酸性)转为红色(偏中性)，最后将细胞培养板放置于二氧化碳培养箱中过夜，备用。
表3 不同规格细胞培养板中水凝胶工作液与细胞培养液的适用量
| 培养板规格 | 单孔底面积(cm2 ) | 水凝胶工作液加入量(μL ) | 细胞培养液加入量(μL ) |
| 9.60 | 1200 | 3600 | |
| 24孔 | 2.00 | 250 | 750 |
| 96孔 | 0.32 | 50 | 150 |
4. 细胞接种与培养：将自备的细胞离心收集后，重新悬浮在细胞培养液中，小心地将细胞悬浮液添加到水凝胶上，置于二氧化碳培养箱中培养；为了更好地促进细胞生长，建议每2天更换一次新鲜细胞培养液，更换时应小心操作，以免破坏胶体结构。