第二轮PCR：

1.        充分融解PCR Mix，按下列表格配制反应液：

2. 按下列条件进行PCR反应：

反应结束后，取10 μl 的PCR反应液（不需要加loading buffer）直接进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，确认PCR扩增产物。

注意事项

1）使用本试剂前请仔细阅读本说明书全文。

2）操作时应尽量少说话，因口腔中也含有支原体，可能引起样品污染，而造成假阳性；整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增应分区域进行，以避免交叉污染。

3）实验时，试剂盒组分中的试剂使用前应充分融化并混匀（混匀时禁止激烈振荡，只需要进行上下倒置多次进行混匀）。

4）反应管中加好所有的试剂后，应尽快上PCR仪进行扩增，以免形成过多的二聚体。

5）细胞培养物中含有青霉素和链霉素等抗生物素不会影响本品的检测结果。如果用户需要进一步提高检测灵敏度，建议细胞在不含青霉素和链霉链等抗生素中进行培养2-3天后送样检测。

6）为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

附录

各种支原体扩增片段大小

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