Cell Counting Kit 简称CCK 试剂盒，为MTT 法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学名：2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

CCK 用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

　　操作说明：

　　一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

　　1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

　　2、按比例(例如：1/2 比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5 个细胞浓度梯度，每组3-6 个复孔。

　　3、接种后培养2-4 小时使细胞贴壁，然后加CCK 试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X 轴)，OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用此标准曲线的前提是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK 后的培养时间。)

　　二、细胞活性检测

　　1、在96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2 的条件下)。

　　2、向每孔加入10 μL 的CCK 溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数)。

　　3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

　　4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

　　5、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

　　三、细胞增值-毒性检测

　　1、在96 孔板中配置100μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时(在37℃，5% CO2 的条件下)。

　　2、向培养板加入10μL 不同浓度的待测物质。

　　3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24 或48 小时)。

　　4、想每孔加入10μL CCK 溶液(注意不要再孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数)。

　　5、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

　　6、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

　　7、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

　　注意：如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK 之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基)，去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

　　备注：

　　①建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK 试剂后的培养时间。

　　②有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔减的差异。加入CCK 试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基页面下加，容易产生气泡，会干扰OD 值读数。

　　③白细胞可能需要培养较长时间。

　　④当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵

　　敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24 孔板或6 孔板实验,请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK 溶液。

　　⑤如果没有450nm 的滤光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之间的滤光片，但是450nm 滤光片的检测灵敏度最高。

　　⑥培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

　　活力计算：

　　细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0 加药)-A(空白)] ×100

　　A(加药)：具有细胞、CCK 溶液和药物溶液的孔的吸光度

　　A(空白)：具有培养基和CCK 溶液而没有细胞的孔的吸光度

　　A(0 加药)：具有细胞、CCK 溶液而没有药物溶液的孔的吸光度

　　*细胞活力：细胞增殖活力或细胞毒性活力

　　保存条件：

　　4℃避光保存，有效期一年。

 北京索莱宝科技有限公司目前备有现货1500种，当天即可发货，可以满足大部分高等院校以及高级研究所的实验要求，同时省去您焦急等待的时间。欢迎前来咨询。