| 牛痘病毒加帽酶 英文名称： CVaccinia Capping Enzyme |
| 型号:null 产品货号： 10615ES76 |
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 |
| 品牌: yeasen 试剂级别： 分子生物学级 |
产品信息 产品描述 真核生物中mRNA经转录后修饰在5端形成一个特殊结构，即帽子结构，该结构对mRNA的稳定、转运与翻译过程均有较重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子结构的有效酶，其由D1和D12两个亚基组成，兼具RNA三***酶活性、鸟苷酰基转移酶活性和鸟嘌呤甲基转移酶活性，可将7-甲基鸟嘌呤帽结构（m7Gppp）连接到RNA的5末端（m7Gppp5N）。牛痘病毒加帽酶，在合适浓度的加帽缓冲液（Capping buffer），鸟苷三***酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在条件下，能够在一个小时之内对RNA进行加帽，效率可达到100%，并且保证正确的方向。 本品以无菌液体形式提供，可应用于体内/体外翻译前mRNA的加帽反应或mRNA的5末端标记反应。 产品性质 运输和保存方法 冰袋运输，-20℃保存，有效期1年。 注意事项 1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作； 2）所提取的RNA需经过纯化并使用无核酸酶的水重悬； 3）在加入酶之前需要对RNA溶液进行加热以去除5末端的二级结构； 4）对于已知5末端结构的RNA，可以延长反应时间至60分钟，提高加帽效率； 5）5末端标记反应体系中，GTP储液应稀释为反应体系中mRNA摩尔浓度的1-3倍。 使用方法 1. 加帽反应 本步骤适用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反应，且可根据实验需要放大。 1）取10 μg RNA至1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至15 μL； 2）65℃加热5分钟； 3）取出离心管置于冰上5分钟； 4）依次加入以下组分： 【注】：10×Capping Buffer配方为：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0；50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。 5）37°C孵育30分钟； 6）RNA加帽完成，可进行后续实验。 2. 5末端标记反应 本步骤适用于5末端带有三***酸的RNA标记，且可根据实验需要放大，其标记效率受反应体系中RNA与GTP摩尔浓度比以及RNA样本中GTP含量影响。 1）取适量RNA到1.5 mL离心管，使用无核酸酶的水稀释至14 μL； 2）65℃加热5分钟； 3）取出离心管置于冰上5分钟； 4）依次加入以下组分： 【注】：GTP mix为GTP和少量标记物，其中GTP使用浓度参照注意事项5）。 5）37°C孵育30分钟； 6）RNA 5末端标记完成，可进行后续实验。 相关产品 |