一、产品简介

 

PangoBeads MagSA 磁珠是采用定向固定技术将重组中性链霉亲和素共价偶联到形态规整、粒径均一的磁性微球上，形成单分子固定层，可用于生物素化核酸、抗体或其他生物素化配体和靶分子的分离和检测。由于具有单层的链霉亲和素，绝大多数生物素结合位点在空间上不仅可以结合游离生物素，而且还可以结合生物素化的配体/靶标，具有快速液相反应动力学特性。形状确定的特异性表面便于进行高效捕获、分离和下游操作，链霉亲和素单层可确保没有明显泄漏，而通过避免吸附过量的链霉亲和素，批次一致性和结果的可重复性得到了保证。PangoBeads Mag SA 以聚合物为基材的实心微球，主要用于免疫检测、免疫沉淀、细胞分选等。

 

二、产品特性

 

产品名称	PangoBeads Mag SA
基质	聚合物
粒径	2μm
浓度	10 mg/ml
保存条件	PBST(pH.4,0.01% Tween-20)，2-8℃

 

			1000 pmol free biotin/mg of beads
		结合量	20μg biotinylated antibody/ mg of beads
			400 pmol biotinylated oligonucleotides/mg of beads
三、注意事项
1.	请勿离心、干燥或者冷冻磁珠，这些操作可能导致磁珠的聚集从而降低结合活性；
2.	从磁珠保存管中移取磁珠前应充分震荡重悬均匀，操作过程中应避免产生气泡；
3.	生物素标记好蛋白或核酸后，用脱盐柱去掉多余的游离生物素；
4.	尽量减少蛋白降解，包括制备细胞裂解液中包含的蛋白酶抑制剂；
5.	生物素化分子的大小会影响磁珠的载量，用户需要根据实验确定磁珠对特定生物素化分子的载   量。

 

四、手动操作步骤

 

以下操作过程需要准备的试剂：

 

 

缓冲液名称		成分
Buffer  I  （适用于结合生	10mM  Tris-HCl（pH7.5），1mM  EDTA，1M  NaCl，
物素化核酸）	0.01%~0.1% Tween-20；
Buffer II  （适用于结合生	PBS ，pH7.4 ，含0.05%	Tween-20 ，可根据需要添加
物素化抗体/蛋白）	0.01%~0.1% BSA；

 

注：用户可根据需要调整缓冲液的盐浓度及pH

 

1. 固定化核酸

 

1.1 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上 20s，振荡重悬磁珠，取 100μl磁珠到新的离心管中，置于磁力架上，1min后移除上清液；注意：用户可根据生物素化分子的多少，参考磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量，

 

建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的 1~2  倍，使磁珠饱和。

 

1.2 用 1ml Buffer I洗涤磁珠二次；

 

磁珠洗涤过程：加入对应的buffer到离心管中，盖上离心管盖，涡旋震荡磁珠15s，磁性分离，移去上清液；

 

1.3 加入 500μl的用 Buffer I稀释的生物素化核酸（使磁珠浓度为 2mg/ml），充分振荡重悬磁珠，将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合 30min；

 

1.4 磁性分离，将上清液转移至新的离心管，用 Buffer I洗涤磁珠三次；

 

1.5 根据后续实验的要求，加入合适的低盐缓冲液，重悬磁珠；

 

备注：用户可以通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量。

 

2．固定化抗体/蛋白

 

2.1 将磁珠瓶置于漩涡振荡器上 20s，振荡重悬磁珠，取 100μl磁珠到新的离心管中，置于磁力架上，1min后移除上清液；注意：用户可根据生物素化分子的多少，参考磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量。

 

建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的 1~2倍，使磁珠饱和。

 

2.2 用 1ml Buffer II洗涤磁珠 3次；

 

磁珠洗涤过程：加入对应的buffer到离心管中，盖上离心管盖，涡旋震荡磁珠15s，磁性分离，移去上清液；

2.3  加入1ml 用Buffer II  稀释的生物素化抗体/蛋白（使磁珠浓度为1mg/ml），充分振荡重悬, 磁珠。将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合 60min；

2.4 磁性分离，将上清液转移至新的离心管中；

2.5 用 1ml Buffer II洗涤磁珠 5次；

2.6 根据客户后续试验需要的磁珠浓度，加入适量 Buffer II或其他合适的缓冲液，重悬磁珠。至此结合生物素化抗体/蛋白步骤完成。磁珠可用于后续操作。