强效动物组织总蛋白提取试剂盒使用说明书

货号：R0010
规格：100ml

强效动物组织总蛋白提取试剂盒配有一支PMSF（100mM，1.5ml）
保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存。
产品简介：强效动物组织总蛋白提取试剂盒是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。强效动物组织总蛋白提取试剂盒提取的蛋白为可溶性总蛋白。

使用强效动物组织总蛋白提取试剂盒说明：

如发现RIPA 有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。
根据使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM，混匀备用（PMSF 现用现加）。
1、样品前处理：
a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6 孔板每孔细胞量加入
150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6 孔板每孔细胞量加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液，用手
指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5-10×105 细
胞/管，然后再裂解。
c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg 组织加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。
用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
2、后处理：
将裂解后的样品10000-14000g 离心3-5 分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western 和免疫沉淀等操
作。

强效动物组织总蛋白提取试剂盒注意事项：
1、 使用本裂解液可以裂解细胞核，释放出核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量SDS
（1%），煮沸后离心测浓度。
2、 本系列动物组织总蛋白提取试剂盒所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA 法或者Lowry 法检测蛋白浓度。
3、 如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。

三种可供选择的强效动物组织细胞总蛋白提取试剂盒的差异：

货号	R0010	R0020	R0030
名称	强效动物组织细胞总蛋白提取试剂盒（高效RIPA组织细胞裂解液）	经典动物组织细胞总蛋白提取试剂盒（RIPA组织细胞裂解液）	温和动物组织细胞总蛋白提取试剂盒（非变性组织细胞裂解液）
有效裂解成分	SDS，NP-40，脱氧胆酸钠，	1% NP-40，0.1% SDS	NP-40，Triton X-100
裂解强度	强	中	温和
蛋白酶抑制剂	含, 配有PMSF	含，配有PMSF	含，配有PMSF
产物	细胞总蛋白	细胞总蛋白	细胞总蛋白
蛋白状态	变性	变性	保持活性状态
主要用途	WB、IP	WB、IP	WB, IP,co-IP

涉及强效动物组织总蛋白提取试剂盒相关产品：

P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
R0010 高效RIPA 组织细胞裂解液
R0030 非变性组织细胞裂解液
P1010 4×蛋白上样缓冲液（含β-***）
PC002 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒
PC0030 Lowry 法蛋白浓度测定试剂盒
P1300 SDS-PAGE 凝胶制备试剂盒