| HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox Plus) 英文名称： HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox Plus) | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 型号:null 产品货号： 11201ES03 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 价格:请致电：010-57128832,18610462672 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 品牌: yeasen | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) 产品信息
产品描述 HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix(No Rox)是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动HieffTM DNA Polymerase、SYBR® Green I、dNTPs、Mg2+。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。 本品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。 适用机型 Bio-Rad: CFX96TM, CFX384TM, iCycler iQTM, iQTM5, MyiQTM, MiniOpticonTM, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4TM; Eppendorf: Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; Qiagen: Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000; Roche Applied Science: LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96; Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler®; Illumina: Eco qPCR. 反应体系（推荐冰上配制）
【注】： 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。 a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1-1.0μM之间进行调整。 b) 模板浓度：1µg RNA的反转录产物需要稀释10倍左右，以减轻RNA对PCR扩增的抑制。 c) 反应体系：推荐使用20μl或50μl，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。 d) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。 扩增程序 （本产品可适用三步法和两步法程序） 三步法程序
两步法程序
【注】： a) 预变性时间：根据不同模板和引物的具体情况可适当缩短至2min。 b) 退火温度和时间：请根据引物和目的基因的长度进行调整。 c) 荧光信号采集：请参考仪器设置。 d) 熔解曲线：通常情况下可以使用仪器默认程序。 结果分析 定量实验至少需要三个生物学重复。反应结束后需要确认扩增曲线及熔解曲线。 1) 扩增曲线：标准扩增曲线为S型。 Ct值落在20-30之间时，定量分析最准确； Ct值小于10，需要将稀释模板后，重新进行实验； Ct值介于30-35之间时，需要提高模板浓度，或者增大反应体系的体积，以提高扩增效率，保证结果分析的准确性； Ct值大于35时，检测结果无法定量分析基因的表达量，但可用于定性分析。 2) 熔解曲线： 熔解曲线单峰，表明反应特异性好可以进行定量结果分析；若熔解曲线出现双峰或者多峰，则不能进行定量分析。 熔解曲线出现双峰，需要通过DNA琼脂糖凝胶电泳判断非目标峰是引物二聚体还是非特异性扩增。 如果是引物二聚体，建议降低引物浓度，或者重新设计扩增效率高的引物。 如果是非特异性扩增，请提高退火温度，或者重新设计更高特异性的引物。 引物设计指南 1. 推荐引物长度25bp左右。扩增产物长度150bp为佳，可以在100bp-300bp内选择。 2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超过2℃。引物Tm值60℃-65℃为佳。 3. 引物碱基分布要均匀，避免出现连续的4个相同碱基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一个碱基最好为G或C。 4. 引物内部或者正反两条引物间最好避免出现有3个碱基以上的互补序列。 5. 引物特异性需要用NCBI BLAST程序进行核对。避免引物3’端有2个碱基以上的非特异性互补。 6. 设计完成的引物需要进行扩增效率的检测，只有具备相同扩增效率的引物才可用于定量比较分析。 注意事项 1. 推荐使用本公司cDNA合成试剂盒（货号：11104），以有效去除RNA样品中残留的基因组。 2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。 运输与保存方式 冰袋运输。-20℃避光储存，有效期1年。 本品避免反复冻融。产品中含有荧光染料SYBR® Green I，保存或配制反应体系时需避免强光照射。 相关产品
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