武汉<br>试剂级别：分子生物学级Brand,null 产品货号： P510Item#, 唾液直接PCR试剂盒<br>英文名称： Saliva Direct PCR Kit

产品介绍 （Product Description）

武汉昌美生物Charm-Boost ^™唾液直接PCR试剂盒，是2X 预混Cocktail，含有反应需要的所有必要成分，包括通过基因工程技术制造的Charm-Boost ^™Taq DNA Polymerase，具有校验功能的高保真酶，Anti-Taq抗体，镁离子，dNTPs，只需加入模板和相应的检测引物即可进行PCR扩增反应，PCR产物可达到12 Kb长。与抗体结合的热启动混合Taq聚合酶在室温下没有任何DNA聚合功能，方便在室温下组建PCR反应，避免可能污染危险。当PCR反应的温度达到94°C时，Taq恢复DNA 聚合功能，从而避免非特异产物的扩增，PCR反应产物具有更高特意性，高敏感和高产量, 配合我们特别针对唾液优化开发的缓冲液，能更有效地高保真扩增唾液DNA，具有超强抗PCR抑制物功能，可直接以昌美生物唾液保存试剂储存的唾液为模板进行PCR扩增，不需要进行唾液DNA的纯化或者其他样本前处理。

产品亮点（Product Feature Highlights）

使用Charm-Boost ™ 唾液直接PCR试剂盒，有以下特点和优势。

1）简便快捷：在室温下组装PCR反应，自动热启动hot-start PCR。可以直接用昌美生物唾液保存液储存的唾液为模板进行PCR扩增鉴定，不需要唾液样本前处理和DNA提纯等步骤。

2）高保真：与抗体结合的Taq聚合酶具有校验高保真功能，具有比单独Taq Polymerase的错误率低6倍。

3）高敏感，高特意性，高产量：以抗体结合的热启动Taq聚合酶，可避免引物非特异结合和延伸，产物特异性高。

4）普适性强：能有效扩增高GC或具有二级机构的DNA片段，扩增长度可达12 kb。

唾液直接PCR反应步骤 （Recommended Saliva Direct PCR Protocol）

以下是专门针对昌美生物唾液保存瓶和干性小管储存的唾液开发的步骤，特别是在首次使用时，建议按照以下步骤执行。

Components	25 ml Rxn	Final Concentration
Charm-Boost^TM Hot Start PCR Mix High Fidelity (2X)	12.5 ml	1X
Forward Primer (10 mM)	0.5 ml	200 nM (Variable:100 - 500 nM)
Reverse Primer (10 mM)	0.5 ml	200 nM (Variable:100 - 500 nM)
Saliva*	1 ml	Variable (fg - mg)
ddH₂O	10.5 ml
Final Volume (ml)	25 ml

*Saliva: 每25 ul的 PCR反应，只需要1 ml昌美生物唾液保存液储存的唾液，唾液量不要超过1.5 ml。

1）在室温下按以上成分装配PCR反应物。

2）盖好PCR反应小管或者96孔PCR盘，轻摇混合好后，放入PCR仪。

3）在94 °C 下孵化 1 – 2 分钟，使模板完全变性。

4）按以下程序进行35 循环扩增反应：

Perform 35 （ 30 -40） cycles of PCR amplification as follows:

▪ Denature 94°C for 15–30 s

▪ Anneal 55-60°C for 15–30 s

▪ Extend 68°C for 1 min per kb

▪ Hold at 4°C until use

5）用 5 – 7 ul PCR产物跑电泳检测PCR产物。

请注意：

1. 以上PCR反应是使用储存的唾液，没有进行DNA纯化，直接作为PCR反应模板，如果实验需要，也可以使用 1 – 5 ml纯化的唾液DNA或者其他纯化的DNA作为模板，进行PCR反应。

2. 如果使用没有纯化的唾液直接用作PCR模板，我们仅仅推荐使用下列昌美生物相关产品保存的唾液，其他公司相应产品保存的唾液，可能也工作，但使用者需要自己测试。

产品亮点（Product Feature Highlights）

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