KAPA快速DNA提取试剂盒

KAPA 快速提取试剂盒 KAPA快速提取试剂盒适合从多种样品中直接提取DNA，仅需10分钟左右。目前市场上的提取试剂盒主要依靠蛋白酶K来消化，但KAPA快速DNA提取试剂盒是一步法提取，且不需要有毒有害化学物质，亦无需繁琐的操作。 一、操作流程： 样品的裂解可以在PCR仪上操作完成，样品处理完成后离心，DNA即存在上清液中。提取的DNA可以直接用于PCR扩增。从每个样品中提取的DNA量，可以满足100次25μl的PCR反应需要，如果长期保存，需要用TE Buffer稀释后于-20℃保存。 二、优势：      1.提取速度快，操作步骤简单，整个过程大约10-20分钟，无需任何有毒有害化学物质和多余的操作步骤； 2.节省实验周期，降低样品丢失或被污染的风险； 3. 可在PCR仪96孔板上批量处理样品，极大提高样品处理速度； 25ul的反应体系中加入1ul的DNA提取物即可，一次提取可满足100次扩增； 4. PCR反应前无需对DNA进行定量； 5.提取产物用TE buffer稀释10倍后于-20℃保存。 三、应用范围： 1.石蜡包埋组织(FFPE)； 2.人的血液（新鲜或EDTA抗凝血、血卡、带血滤纸）； 3.血卡、带血滤纸 4.口腔拭子； 5.人的毛囊； 6.小鼠耳片、尾巴尖； 7.鱼鳍或鱼肉。 表1. KAPA快速提取实验操作步骤 步骤 内容 反应体系 将下面的试剂加入反应管中 10x KAPA quick Extract Buffer 10ul 1U/ul Quick Extract Enzyme 2.0ul PCR grade water Up to 100ul 样品  见下表 裂解 75℃，5-10分钟 细胞被裂解，核酸酶和其他蛋白被降解，DNA被释放出来 热失活 95℃ 5分钟，失活试剂盒中的酶 回收与保存 震荡2-3秒钟，高速离心1分钟，将含有DNA的上清转移到一个新的管中。 取1ul进行PCR反应； 保存：用TE buffer稀释后-20℃长期保存。 表2.样品种类与推荐的酶量、裂解时间的对应表 样品类型 样品尺寸/体积 裂解温度与时间 石蜡组织 1mm3或2mm210um厚度切片 75℃，10分钟 人血（鲜血或EDTA抗凝血） 2ul 75℃，5分钟 血卡 1-2 mm2 75℃，10分钟 头发毛囊 至少3根 75℃，5分钟 口腔拭子 1.5ml的管中加入1个口腔拭子，加入300ul 0.5×KAPA Quick Extract Buffer 75℃，10分钟 小鼠尾巴 ~2mm3 75℃，10分钟 小鼠耳片 2mm2 75℃，10分钟 鱼鳍片 2mm2 60℃，10分钟 鱼肉 ~2mm3 60  10分钟 多功能性：可以快速提取不同类型的样品 KAPA Express Extract适用于不同类型组织的DNA提取，包括buccal swabs、毛囊、FFPE组织、骨髓、血液和加工食品等，而且比传统的DNA提取更加简单方便，并且提取效率高。 图1：用KAPA Express Extract在哺乳动物和鱼中提取DNA，取2μL直接进行PCR，扩增650bp的细胞色素氧化酶Ⅰ基因，用于分类，下图为PCR产物经1琼脂糖凝胶电泳检测结果及产物测序结果。  FFPE组织中DNA提取速度快PCR成功率高 图2：KAPA Express Extract从两个不同的FFPE样品中提取DNA，样品1保存6个月以上，样品2保存1年以上，DNA提取后直接进行PCR扩增，EGFR基因的5个不同的片段（293bp-1kb），增结果与使用相同反应条件和循环数的使用1ng纯化的DNA进行扩增的结果进行比较。  不同类型的血液样品的DNA提取 产品规格 产品 货号 规格 KAPA Express Extract Kk7100 50次 KAPA Express Extract Kk7101 100次 KAPA Express Extract Kk7102 250次 KAPA Express Extract+PCR ReadyMix Kk7151 100次 KAPA Express Extract+PCR ReadyMix Kk7152 500次