HEPES N- 2 -羟乙基哌嗪- N'-2-乙磺酸 Sigma
型号:null    产品货号： H3375
价格:请致电：010-57128832,18610462672
品牌: sigma


现货供应 促销价7.8折扣！！！

windowtext;">
HieffTM Taq DNA Polymerase (5U/μL)
200μL
200μL×5
产品应用
基因型鉴定、菌落PCR
活性定义
用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃，30min内，摄入10nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
质量控制
核酸外切酶残留检测：20μL反应体系，10U本品和0.6μg λ-HindIII，74℃下孵育1h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：20μL反应体系，10U本品和0.6μg Supercoiled pBR322 DNA，74℃下孵育1h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测:50μL体系中，加入2U本品，以无菌ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
PCR反应体系（推荐冰上配制）
组分
体积（μL）
终浓度
ddH2O
to 50
-
10×Taq Buffer (Mg2+ Free)
5
1×
25mM MgCl2
3
1.5mM
dNTP Mix (10mM each)
1
1mM
模板DNA
适量
-
引物1 (10μM)
2
0.4μM
引物2 (10μM)
2
0.4μM
HieffTM Taq DNA Polymerase (5U/μL)
0.4
0.025U/50μL
【注】：
1) 试剂使用：组分A和组分B使用前需充分融化混匀。
2) 聚合酶浓度：推荐使用0.025U/50μL。可以在0.025-0.04U/50μL之间进行优化。
3) 聚合酶添加：室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，防止非特异性扩增，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
4) Mg2+ 终浓度：体系终浓度为1.5mM。如有特殊需要，可用25mM MgCl2，以0.2-0.5mM为间隔向上摸索。
5) 不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
模板种类
扩增片段100bp~4kb
基因组DNA
50ng~200ng
质粒DNA
10pg~20ng
cDNA
1~5μL (不超过反应体系的1/10)
PCR扩增程序
循环步骤
温度（℃）
时间
循环数
预变性
94
30sec-5min
1
变性
94
30sec
35
退火
50-60
30sec
延伸
72
60sec/kb
终延伸
72
10min
1
【注】：
1) 预变性温度和时间：推荐使用94℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min；高GC含量模板为5-10min。
2) 退火温度和时间：推荐使用60℃。退火温度过低会导致非特异性扩增。引物设计参考荧光定量引物标准。推荐退火时间设置为20sec，可以在10-30sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度和时间。
3) 延伸温度和时间：推荐使用72℃。
4) 扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。
注意事项
1. 推荐使用本公司PCR Enhancer （货号：10117），以扩增高GC含量的目的基因。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。
相关产品
产品名称
产品货号
规格
价格（元）
2×HieffTM PCR Master Mix (With Dye) 火爆
10102ES03
1mL
40.00
10102ES08
5×1mL
150.00
2×HieffTM PCR Master Mix (No Dye)
10103ES03
1mL
40.00
10103ES08
5×1mL
150.00
UNICONTM HotStart Taq DNA Polymerase （抗体法热启动Taq酶）
10113ES60
100U
216.00
10113ES76
500U
656.00
HieffTM Hot Start DNA Polymerase（配体法热启动DNA聚合酶）
10110ES72
250U
186.00
10110ES80
4×250U
636.00
Hieff CloneTM Zero TOPO-TA Cloning Kit 零背景TOPO-TA克隆试剂盒火爆
10907ES20
20T
528.00
10907ES60
5×20T
2378.00
Hieff CloneTM Zero TOPO-TA Simple Cloning Kit, MCS-Depleted 零背景TOPO-TA克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点）火爆
10908ES20
20T
528.00
10908ES60
5×20T
2378.00
PCR Enhancer PCR 增强剂
10117ES03
1mL
102.00
HB170612