双链DNA(dsDNA)定量检测试剂盒
英文名称: PicogreendsDNA Assay Kit
型号:null    产品货号: 10225ES84
价格:请致电:010-57128832,18610462672
品牌: yeasen

 

Cat#:10225

冰袋运输&按照试剂盒各组分保存

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

PicogreendsDNA Assay Kit

双链DNA定量检测试剂盒

使用手册V1.0

 

本产品仅作科研用途!

上海翊圣生物科技有限公司客服热线:4006-111-883                      E-mail: order@yeasen.com


产品信息

产品名称          

产品编号

规格

价格(元)

PicogreendsDNA Assay Kit 双链DNAdsDNA)定量检测试剂盒

10225ES84

2000T

4238.00

产品描述

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义,疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

常用的检测核酸的方法有:1)紫外吸光法(A260),该法操作简便,但DNA样品中核苷酸、单链DNARNA和蛋白质对紫外吸收信号影响很大,还容易受到核酸样品中污染物的干扰,不能区分DNARNA,而且灵敏度低(ΔA260=0.1相当于5ug/mldsDNA);2)探针杂交法,该法是传统检测微量DNA的常用方法,基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求,但是该法耗时较长,操作繁琐,稳定性、敏感性和特异性较差;3Hoechst33258染料法,Hoechst33258是一种一定程度上特异于双链DNA的核酸染料,基本不受蛋白质等污染物的干扰,可以检测低至10ng/mlDNA;在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。

PicogreendsDNA定量法:Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNARNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25pg/mldsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNAPCR扩增产物。

相比传统的方法,PicogreendsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

若每次分析体积为2 mL,本试剂盒各组分试剂足够200次分析使用,若使用微孔板或96孔板检测,每次使用量200µl,则各组分试剂足够2000次分析。

产品组分

编号

组分名称

产品编号/规格

保存

10225ES84/2000T

10225-A

PicogreendsDNA Quantitation Reagent

100µl×10

2~6避光干燥

10225-B

2×TE buffer

50ml

2~6(短期)-20(长期)

10225-C

Calf thymus DNA standard (100µg/ml)

1ml

2~6(短期)-20(长期)

运输和保存方法

冰袋运输。

保存方法参照【产品组分】各组分保存方式。其中2×TE bufferCalf thymus DNA standard若不经常使用,请置于-20长期保存。

注意事项

1Picogreen定量试剂含有DMSO(已知有毒试剂),请小心操作;

2)尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性,但是该试剂能结合双链DNA,请操作时务必小心。


试剂准备

11×TE buffer 的配制:将2×TE 用无菌去离子水(不含Dnase)等体积稀释至工作液。

2PicoGreen工作液的配制:使用前将PicoGreendsDNA定量试剂回温至室温;PicoGreen是以100µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的(共10管)。实验当天,根据实验需求用1×TE1:200 的比例稀释适量定量试剂浓缩液。例如要准备足够的操作溶液以2ml检测体系测定20个样品,可向19.9mL1×TE 中加入100μL PicoGreendsDNA定量试剂。

【注】:a、由于试剂容易吸附到玻璃表面,要在塑料容器中配制。

bPicoGreen试剂见光易降解,所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。

c、溶液最好在配制好数小时内使用,以保证最佳结果。

检测步骤

1 2µg/mlCalf thymus DNA standard浓缩液的配制

1×TECalf thymus DNA standard (100µg/ml)进行50倍稀释,即向30µl Calf thymus DNA standard加入1.47ml 1×TE混匀即可。

2、标准曲线的制备

比色皿体系检测---2ml

a、按照表1 向一次性微量比色皿中加入TE2µg/ml Calf thymus DNA standard,随后加入1ml PicoGreen定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。【注】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。

1 比色皿体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

TE (µl)

2µg/mlCalf thymus DNA standard (µl)

稀释的PicoGreen定量试剂(µl)

Calf thymus DNA standard终浓度

0

1000

1000

1µg/ml

900

100

1000

100ng/ml

990

10

1000

10ng/ml

999

1

1000

1ng/ml

1000

0

1000

blank

b、于荧光仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=480nm/520nm

【注】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值,对DNA浓度和荧光值做标准曲线。

微孔板体系检测(200µl

a、按照表296孔板中加入TE2µg/ml Calf thymus DNA standard,随后加入100µl PicoGreen定量试剂,混匀后,于室温避光孵育2-5min,并以1×TE缓冲液为blank。【注】:确信不要在样品中引入气泡,轻轻地弹微量检测皿的外部,可以驱散气泡。

1 酶标板体系所需加入各组分量及标准品终浓度表

TE (µl)

2µg/ml Calf thymus DNA standard (µl)

稀释的PicoGreen定量试剂(µl)

Calf thymus DNA standard终浓度

0

100

100

1µg/ml

90

10

100

100ng/ml

99

1

100

10ng/ml

99.9

0.1

100

1ng/ml

100

0

100

blank

b、于荧光酶标仪中检测各浓度荧光值,Ex/Em=480nm/520nm

【注】:为了确保荧光读数在荧光仪的检测范围内,应调节增益使含最高DNA浓度的样品荧光值与荧光仪的最大值一致;为了减少光漂白,应保持所有样品的检测时间一致。

c、各浓度得到的荧光值减去空白对照荧光值,对DNA浓度和荧光值做标准曲线。


附表

Picogreen定量耐受的污染物列表

物质名称

最大耐受浓度

信号变化百分比

Salts

Ammonium acetate

50 mM

3% decrease

Sodium acetate

30 mM

3% increase

Sodium chloride

200 mM

30% decrease

Zinc chloride

5 mM

8% decrease

Magnesium chloride

50 mM

33% decrease

Urea

2 M

9% increase

Organic Solvents

Phenol

0.1%

13% increase

Ethanol

10%

12% increase

Chloroform

2%

14% increase

Detergents

Sodium dodecyl sulfate

0.01%

1% decrease

Triton X-100

0.1%

7% increase

Proteins

Bovine serum albumin

2%

16% decrease

IgG

0.1%

19% increase

Other Compounds

Polyethylene glycol

2%

8% increase

Agarose

0.1%

4% increase

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产品名称

规格

价格(元)

10224ES01

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNAdsDNA)定量试剂

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10224ES02

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1×1ml

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