中心产品手册-2010.pdf
抗体纯化介质


1、产品简介
Protein A能特异性地与抗体的Fc区结合,所以Protein A亲和介质可用于抗体(单抗和多抗)的分离纯化,经过一步亲和层析,即可从腹水、血清和培养液等样品中得到高纯度的抗体。Protein A QZT 4FF亲和介质以自制的琼脂糖凝胶为基质,以重组Protein A为配基,具有很高的物理化学稳定性,配基不易脱落,寿命长,使用方便,应用广泛。
2、产品特性
参数 | 指标 |
基质 | 4%交联琼脂糖凝胶 |
配基 | r-Protein A |
形状 | 球形 |
介质平均粒径 | 90 μm (45-165) |
配基密度 | 6mg ProteinA/ml wet gel |
动态载量 | 30-40mg rabbitIgG/ml wet gel |
最高流速(25℃) | 450 cm/h |
推荐流速 | <150 cm/h |
最高耐压 | 0.3 MPa (3 bar) |
pH稳定性 | 3~10(长时间);2~11(短时间) |
保存 | 4~8 oC(20%乙醇) |
3、应用
Protein A QZT 4FF广泛用于各种抗体的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡:用5~10CV的平衡缓冲液(20 mM PB+0.15M NaCl,pH 7.0,添加适当浓度的NaCl抑制非特异性吸附)平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
进料:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤(0.45μm)处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗:上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱:用洗脱缓冲液(20 mM乙酸钠,pH 3.0-4.0或0.1M甘氨酸,pH 3.0)洗脱,收集流出液。洗脱后,应立刻用碱性缓冲液(如1M Tris/HCl, pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到中性,避免抗体失活,维持抗体的生物活性。
再生、原位清洗:介质使用数次(5-10次,具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行再生、在位清洗。
(1)用0.1M的乙酸或0.1M的乙酸/20%乙醇淋洗柱子3-5CV,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用;
(2)也可用0.05M NaOH+1M NaCl或6M盐酸胍淋洗柱子3-5CV,并用3~10 CV的纯水冲洗,然后用缓冲液洗到中性即可重复使用。
其它注意事项:在装柱、使用和保存柱子的时候,要避免柱子流干,气泡进入。
具体的应用实例如下:
蛋白:来源于兔血清的IgG;
层析介质:Protein A QZT 4FF介质(CV=1.0 ml);
对照介质:CV=1.0 ml, 国际领先品牌;
样品:兔血清;
平衡缓冲液:20 mM PB+0.15M NaCl,pH 7.0;
洗脱缓冲液:0.1M甘氨酸,pH 3.0;
流速:0.5 ml/min。
图1 本中心生产的Protein A亲和介质与进口介质的分离效果比较
4、规格
货号 | C-04 |
产品名称 | ProteinA亲和介质 |
配基密度 | |
pH稳定性 | 2 ~ 11 |
粒径范围(μm) | 45 ~ 165 |
最大流速(cm/h) | 400 |
应用 | 用于多种抗体的纯化 |
价格(¥) | 50mL | 6000 |
250 mL | 22000 |
1 L | 55000 |
5、 特色服务
(1)提供介质筛选及工艺开发的咨询。
(2)接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。
(3)按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。
(4)为客户提供专业的售前和售后服务。