免疫组化技术服务

世联博研生命科学服务中心长期专业对外承接免疫组化技术服务，世联博研生命科学服务中心提供的对外免疫组化技术服务不仅具有国内外的技术水

平，更有良好的售后服务和you质的解决方案。

服务范围

本服务项目主要接收委托单位的蜡块和切片，进行免疫组化检测，提供高质量免疫组化染色和分析结果。如：肿瘤相关基因的耐药

、预后、癌基因、抑癌基因，有关糖尿病各种蛋白的表达，正常、变异神经细胞的表达等其它基础研究领域的免疫组化检测。

收费标准

1、组织的石蜡包埋与石蜡切片：

客户提供石蜡包埋组织：<50张 500元；>50张 10元/张

2、细胞片：

客户提供生长良好的一瓶细胞，本公司提供传代培养的ALL器材和处理好的玻片，制备细胞爬片，收费标准：100 元 / 批，每批可

提供10 张左右细胞片。

3、免疫组织化学实验服务：

方法：使用 HRP 标记系统进行检测

客户提供组织切片或细胞爬片，免疫组化服务费用为80元/抗体，若切片数量少于10张，一次服务收费800元。若切片数大于40张，

费用为70元/张。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

1.客户须在实验开始前确保其提供材料的数量和质量，并提供相关信息。

A. 客户可以提供相应的组织切片、细胞爬片等，也可提供细胞或组织，提供组织时需提供尽量多的新鲜样品（组织：10-20mg米粒

大小或直接提供≥1立方厘米大的石蜡样本），样本需-20℃保存。新鲜样品立即存于液氮或-80℃保存不超过一个星期。

B.一抗连同抗体说明书由客户提供，也可由本公司提供或帮忙购买，费用另计。

2.本公司在收到客户提供的研究材料后的弟二个工作日起开始实验。

服务程序

1.可在我公司网站内直接填写《免疫组化技术服务订单》发至我公司邮箱。

2.可下载订单，填写完成后，用传真的形式发到我公司。

3.可电话联系详谈有关具体要求和服务内容。

4.签订《免疫组化技术服务合同》，预付实验总费用的50%作为实验预付款。

5.寄送：委托单位的试验材料和试剂等均须采用te快专递形式邮寄，有低温要求的、固定要求的，按低温保存、固定防碎方法运输，以确保实验物品的安可靠。

6.实验结束后，本公司将结果及时发给客户，同时根据客户要求处理相关材料：

·免疫组化图片；

·详细的实验步骤；

·完整的实验报告（材料，方法，实验结果及结果说明）。

7.客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失部由客户承担。

服务咨询及技术支持

电话:

Email:SLBY800@163.COM

免疫组化实验原理

根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行

反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，后通过呈色反应或荧

光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片

或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。

免疫组化主要步骤

（一）切片制备

1.洗载玻片：将载玻片置于重铬酸钾和浓H2SO4混合液中，目的是为了将载玻片上的硅胶等除去，同时使一些肉眼看不见的凹凸不平

的表面变平整，便于组织吸附，然后置于清水中清洗，除去残余的重铬酸钾和浓H2SO4 (大约冲一个小时左右)，再将载玻片浸泡于

酒精之中，然后放到架子上，置于37°C温箱中，将多聚赖氨酸涂布于玻片的表面，由于Lys带正电，而大多数的组织带负电荷，从

而产生吸附作用。

2.包埋组织：先在铁模具中加入一些液态石蜡，先稍微冷却，然后再将待包埋的组织置于石蜡之中，并排列整齐，再将塑料模具盒

盖上，后加入少许液体石蜡，进行冷冻，使石蜡变成固态。
3.切片：将包埋好的组织从模具上取下来，并置于石蜡切片机上，切片机通过调节上下左右来使组织和切割方向一致，然后调节切

片的厚度，一般为5mm， 如果比较难切，则可以适当调整厚度。用小镊子将包含有完整组织的载玻片置于40°C温水中。

4.捞组织：当组织载玻片置于40°C温水中之前，要先将水浴中的气泡赶走，以免气泡受热上浮而贴到组织上，组织受热展开，好

是组织不起皱纹，用载玻片捞组织时，一般取载玻片的下1/3或者下1/2一般每种组织捞5-6张，其中2-3张是备用的，每张载玻片上

通常捞两份组织，做对照使用，这样形成的误差就比较小了，而且捞载玻片的时候好方向一致，以便观察，再将捞出来的载玻片

置于架子上，放入37°C温箱中烘干。

（二）免疫组化染色流程
SP法

1）脱蜡、水化；

2）PBS洗2～3次各5分钟；

3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；

4）PBS洗2～3次各5分钟；

5）抗原修复；

6）PBS洗2～3次各5分钟；

7）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。

8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。

9）4℃过夜后需在37℃复温45分钟。

10）PBS洗3次各5分钟；

11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时；

12）II抗中可加入0.05%的tween-20。

13）PBS洗3次各5分钟；

14）DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；

15）PBS或自来水冲洗10分钟；

16）苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；

17）自来水冲洗10～15分钟；

18）脱水、透明、封片、镜检。

SABC法

1）脱蜡、水化。

2）PBS洗两次各5分钟。

3）用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次。

4）抗原修复。

5）PBS洗5分钟。

6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。

7）滴加Ⅰ抗，室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。

8）PBS洗三次每次2分钟。

9）滴加生物素化二抗，20℃～37℃20分钟。

10）PBC洗3次每次2分钟。

11）滴加试剂SABC，20℃～37℃20分钟。

12）PBS洗4次每次5分钟。

13）DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。

14）蒸馏水洗。苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。

15）脱水、透明、封片、镜检。

FAQ（Frequently Asked Questions）

1. 如果由公司制作石蜡包埋切片，大概要提供多少数量的组织？

提供体积大约为25mm3组织样品。

2. 切片制作好，观察完后可以寄回我手里吗？

可以的。