在自然界中，化脓性链球菌Cas9由两个独立的rna编程，crRNA和tracrRNA。

用两个RNA编程，约20个核苷酸适合在实验室中使用，用于转录的双链DNA [cRNA，或CRISPR RNA序列包含大约20个核苷酸的同源性，与DNA链的相反和上游的PAM（Protospacer Adjacent Motif）（NGG）序列

EngE-SGNA合成试剂盒，S、 pyogenes结合了一种S.pyogenes-Cas9特异性支架寡糖（包括在EnGen 2X-sgRNA反应混合物中），该寡糖与用户设计的靶向特异性寡糖部分互补。这两个寡聚体在重叠区域退火，由DNA聚合酶填充，形成一个双链DNA（dsDNA）模板进行转录。dsDNA模板的合成和RNA的转录发生在一个单一的反应中，从而产生一个功能性的sgRNA。

tracrRNA或transactivating crRNA包含crRNA的部分互补序列以及Cas9所识别的序列和二级结构。这些序列已被适配于实验室中，通过将TracrRNA和CRRNA结合成一个长的单导引RNA（SGRNA）（1）能够与CAS

在自然界中，化脓性链球菌Cas9由两个独立的rna编程，crRNA和tracrRNA。

用两个RNA编程，约20个核苷酸适合在实验室中使用，用于转录的双链DNA [cRNA，或CRISPR RNA序列包含大约20个核苷酸的同源性，与DNA链的相反和上游的PAM（Protospacer Adjacent Motif）（NGG）序列

EngE-SGNA合成试剂盒，S、 pyogenes结合了一种S.pyogenes-Cas9特异性支架寡糖（包括在EnGen 2X-sgRNA反应混合物中），该寡糖与用户设计的靶向特异性寡糖部分互补。这两个寡聚体在重叠区域退火，由DNA聚合酶填充，形成一个双链DNA（dsDNA）模板进行转录。dsDNA模板的合成和RNA的转录发生在一个单一的反应中，从而产生一个功能性的sgRNA。

tracrRNA或transactivating crRNA包含crRNA的部分互补序列以及Cas9所识别的序列和二级结构。这些序列已被适配于实验室中，通过将TracrRNA和CRRNA结合成一个长的单导引RNA（SGRNA）（1）能够与CAS9络合以识别和切割靶DNA。