为高通量用户开发并设计用于BAC或fosmid DNA制备的illustra Tempiphi大型构建试剂盒使用等温滚圈扩增（RCA）从大型DNA载体（fosmid和BAC）制备DNA测序模板。[

生成5μg总DNA、1-10 ng纯化BAC或fosmid DNA；甘油储备或细菌培养简化过程，在18小时内完成20分钟的手控时间扩增，无需热循环，为制备BAC或fosmid DNA测序模板，开发了一种重复性好、自动化程度高的模板大结构DNA扩增试剂盒（TempliPhi-LC试剂盒）。模板法利用噬菌体Phi29 DNA聚合酶酶通过滚圈扩增（RCA）对单链或双链环状DNA模板进行指数扩增。这种等温扩增方法在几个小时内从picgram量的起始物质中产生微克量的DNA。极少量模板DNA的体外扩增消除了隔夜细胞培养和传统质粒或M13 DNA纯化的需要。Phi29 DNA聚合酶的校对活性确保了DNA复制的高保真性。

扩增的起始材料可以是少量含有BAC或fosmid DNA的细菌细胞，或者任何环状DNA样本。细菌菌落可以从琼脂平板上提取，直接加入到模板反应中。或者，每毫升的饱

为高通量用户开发并设计用于BAC或fosmid DNA制备的illustra Tempiphi大型构建试剂盒使用等温滚圈扩增（RCA）从大型DNA载体（fosmid和BAC）制备DNA测序模板。[

生成5μg总DNA、1-10 ng纯化BAC或fosmid DNA；甘油储备或细菌培养简化过程，在18小时内完成20分钟的手控时间扩增，无需热循环，为制备BAC或fosmid DNA测序模板，开发了一种重复性好、自动化程度高的模板大结构DNA扩增试剂盒（TempliPhi-LC试剂盒）。模板法利用噬菌体Phi29 DNA聚合酶酶通过滚圈扩增（RCA）对单链或双链环状DNA模板进行指数扩增。这种等温扩增方法在几个小时内从picgram量的起始物质中产生微克量的DNA。极少量模板DNA的体外扩增消除了隔夜细胞培养和传统质粒或M13 DNA纯化的需要。Phi29 DNA聚合酶的校对活性确保了DNA复制的高保真性。

扩增的起始材料可以是少量含有BAC或fosmid DNA的细菌细胞，或者任何环状DNA样本。细菌菌落可以从琼脂平板上提取，直接加入到模板反应中。或者，每毫升的饱和细菌培养物或甘油储备可以作为起始材料。无论起始材料的来源如何，放大在30℃下在18小时内完成，无需热循环。模板大分子结构反应的产物是高分子量、双链的环状模板缩合物。TempliPhi大结构产物是双链DNA，可以用正向和反向引物进行测序。用模板大结构扩增法扩增的DNA可直接用于循环测序反应，无需任何纯化。

将试剂盒储存在-70°C下。酶混合物必须储存在-70°C下；所有其他成分可储存在-20°C下。

从微升量的纯化模板以及细菌培养物或甘油储备开始。