慢病毒载体服务

服务项目简介

慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性：能整合入宿主细胞基因组，长期表达；还拥有比逆转录病毒更you越特性：如比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞，更重要的是还能感染非分裂的细胞。

利用Lentivirus构建的shRNA表达载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA载体经包装系统包装后，可用于感染传统转染试剂难于转染的细胞（如原代培养细胞、悬浮细胞等），并且在感染后可以整合到受感细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，是制备稳定表达shRNA细胞株和进行体内实验(in vivo)的有效手段。

病毒包装：用于基因治疗、蛋白表达、药物筛选、基因功能验证等，是现代分子生物学研究的一个好工具。

本公司慢病毒包装体系有Invitrogen公司4质粒系统、SBI公司4质粒系统、Clontech公司5质粒系统、Tronolab实验室3质粒系统等系统，客户可以选择，我们也可以根据客户需求选择相应包装体系。

服务内容

1. 慢病毒包装服务

客户提供的感兴趣的基因或者基因突变体的慢病毒构建和包装技术服务，表达框大小限制在9kb之内。

2. siRNA慢病毒服务项目

RNAi产品，其中shRNA由U6启动子驱动，通过慢病毒介导整合于感染细胞基因组中，实现长期的目的基因敲减。我们可以提供同时携带GFP和嘌呤霉素抗性基因，或者单携带其中之一RNAi产品。

3. microRNA慢病毒系列产品

这里的基因包括几乎ALL现有已知目的microRNA，这里物种包括人、小鼠以及大鼠。

4. 过表达慢病毒系列产品（iPS干细胞、细胞因子、营养因子等）

除了客户提供所包装的过表达基因，公司还有一系列过表达载体，如构建iPS的SOX-2、OCT-4、NANOG、c-Myc等基因的过表达载体，还有一些细胞因子和营养因子等系列产品。

技术步骤

根据目的基因相关信息（序列、基因序列号等），构建含有外源基因或序列的重组载体；对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T细胞，进行病毒包装并收集上清液；通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；用病毒感染293T细胞，测定病毒滴度；

用高质量的病毒感染靶细胞，通过实时定量PCR或者Westen blot检测目的基因表达，也可以进一步进行稳定细胞株的筛选用于长期的功能学研究。
1. 根据目的基因相关信息（序列、基因序列号等）获取目的基因；
2. 选择符合实验要求的载体；
3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；
4. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；
5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液；
6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
7. 使用病毒感染293T细胞，测定病毒滴度。

应用实例

基因功能研究（体内/体外），药物研发、细胞建系、基因治疗、转基因动物模型等

应用领域

慢病毒载体能够产生表达目的基因的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性细胞、干细胞、受精卵以及分化的后代细胞中表达目的基因，实现在多种类型的细胞和转基因小鼠中te异而稳定的基因表达的功能性沉默，为在原代的人和动物细胞组织中快速而高效地研究基因功能，以及产生te定基因表达降低的动物提供了可能性。

服务周期

8~10周左右。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

目前我们能够为客户提供从载体构建到慢病毒包装纯化和检测的一站式服务；同时公司还在高效慢病毒生产技术的基础上建立并完善了慢病毒载体制备转基因动物的实验技术。公司还承接慢病毒操作相关实验。

服务咨询及技术支持

电话:

Email:SLBY800@163.COM