腺病毒载体服务

服务项目简介

腺病毒（Adenovirus）是目前高效可靠的重组病毒表达系统之一，可用于在哺乳细胞中瞬时及高水平地表达shRNA或目的蛋白。其具备以下you点：

1. 宿主范围广。腺病毒可感染一系列哺乳动物细胞，除可感染几乎ALL人的细胞类型外，还可感染大鼠、小鼠、兔、猪、羊、猴、鸡等物种细胞。
2. 因腺病毒的感染不依赖细胞周期，故其既可以感染增殖细胞也可以感染非增殖细胞。
3. 腺病毒具有嗜上皮细胞特性，因目前大多数肿瘤细胞均属于上皮细胞，这使得腺病毒非常适合应用于基因治疗领域。
4. 腺病毒滴度高，可用于动物水平的实验。
5. 有较好的生物安性。腺病毒携带的基因不会整合到宿主细胞基因组中；实验中虽然会有一定机率出现RCA（即复制型腺病毒），但由于大多数成人体内都有针对腺病毒的抗体，一般情况下，危险性不是很高。

技术路线

（一）常用腺病毒载体的包装方法（包括病毒E1、E3缺陷）：

1. 经典的同源重组法（双质粒共转染）：原理是HEK293细胞内同源重组。

2. Ad-Easy法：通过同源臂重组的方式在细菌中获得重组腺病毒基因组质粒。

3. AdMax包装系统：通过Cre/loxP获得重组病毒，这个过程发生在HEK293细胞中，将克隆了外源基因的腺病毒穿梭质粒与携带了腺病毒大部分基因组的包装质粒共转染HEK293细胞，利用Cre/loxP系统的作用实现重组，产生重组腺病毒。

4. Ad5/F35MaxTM包装系统： Ad5/F35是Ad5的病毒纤突（Fiber）被改造成35型腺病毒纤突的嵌合型腺病毒载体。对各种造血细胞和肿瘤细胞的感染效率高于普通Ad5、外源基因表达量更多，包装系统高效且稳定，是目前方便快捷的腺病毒（Ad5/F35）包装系统。

5. Ad5/F11包装系统：Ad5/F11是Ad5的病毒fiber改造成为11型腺病毒的Fiber，te别针对血液细胞的感染，弥补Ad5的不足。

（二）构建步骤：

1. 腺病毒载体构建：将目的基因连入穿梭质粒；

2. 病毒包装、扩增：
（1）将鉴定正确的基因克隆到慢病毒载体，与辅助载体一起转染293T细胞进行包装；
（2）将包装好的病毒超速离心收集；
（3）将浓缩病毒进行滴定（TCID50法），滴定结果单位为IU/mL（一般为1011-1013IU/ml以上，根据客户需要，不同量有价格差异）

3. 质量控制与鉴定：
（1）测序鉴定；
（2）根据te定引物作RT-PCR鉴定；
（3）蛋白表达鉴定（根据客户要求并由客户提供高te异性抗体）

4. 技术步骤

构建步骤

（1）将外源基因构建至穿梭载体上。
（2）将穿梭载体与腺病毒骨架载体进行LR体外重组。
（3）将重组成功的腺病毒载体线性化，转染至HEK293细胞中，包装腺病毒。
（4）将获得的腺病毒感染HEK293细胞，继续扩增，以获得更多的腺病毒。
（5）收获腺病毒，提取其基因组DNA，进行PCR鉴定，以确定所得腺病毒的正确性。

服务内容

（1）表达shRNA用重组腺病毒包装。
（2）基因过表达用重组腺病毒包装。

应用领域

基因治疗，基因组学，RNAi等。

服务周期

总计需要50-70个工作日内，得到1011-1013VP的高纯度病毒。

客户须知（对材料的要求、注意事项）

（1）大插入片段5kb-8Kb，插入片段的长度不同，技术难度也不同；

（2）本公司提供的病毒量为≥109；

（3）提供详尽、完整的实验报告。

附：腺病毒和慢病毒比较表

服务咨询及技术支持

电话:

Email:slby800@163.com